黑果腺肋花楸花色苷提取物对急性肺损伤修复作用的研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuliushuang
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)是一种由于直接或间接致伤因素导致肺部细胞受损,产生失控性反应的肺病理性损伤。严重时则导致急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distress syndrome,ARDS),也是新冠肺炎主要的致死因素之一。此外,ALI是危害人类健康且死亡率高达40%的重大疾病。它因发病机制复杂而引起人们的重视。目前,已有许多研究表明,一些抗炎、抗氧化与抗凋亡药物对ALI具有潜在治疗作用,但仍存在一些不良影响。因此,寻找更有效的防治方法意义重大。黑果腺肋花楸(Aronia melanocarpa)是一种十分特别的小浆果,它的果实中富含多种营养物质,特别是多酚类物质。而花色苷作为其主要的多酚类物质具有十分广泛的功效,如抗炎效应。但花色苷的抗炎作用对ALI是否产生抑制以及相关作用机制报道鲜少。因此,本文对黑果腺肋花楸花色苷提取与纯化、种类鉴定、体外抗氧化能力,对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的抗炎修复作用进行研究,以期对急性肺损伤辅助治疗方法及药物加工处理方式提供新的思路。主要研究结果如下:采用单因素试验和响应面优化常规酸化乙醇提取法(Et OH)、天然低共熔溶剂(NADES)提取法、超声-微波协同乙醇提取法(UMAE-Et OH)及超声-微波协同天然低共熔溶剂提取法(UMAE-NADES)的工艺条件。以花色苷提取含量为指标,从试验周期、耗能、耗材等方面综合考虑,对四种提取方法进行比较。Et OH最佳工艺条件为乙醇体积分数60%、料液比1:36 g/m L、提取时间72 min、提取温度60°C,得到花色苷含量为2.996±0.013 mg/g,提取率为82.25±0.80%;NADES的最佳工艺条件为种类选择氯化胆碱-甘油(Ch Gly)、摩尔比1:2、含水量30%、料液比1:26 g/m L、提取时间51 min、提取温度51°C,得到花色苷含量为3.311±0.018 mg/g,提取率为87.66±0.67%;UMAE-Et OH的最佳工艺条件为料液比1:25 g/m L、提取时间485 s、提取温度45°C、微波功率226 W,得到花色苷含量为3.599±0.09 3mg/g,提取率为93.09±0.75%;UMAE-NADES的最佳工艺条件为料液比1:15 g/m L、提取时间367 s、提取温度52°C、微波功率230 W,得到花色苷含量为4.456±0.032 mg/g,提取率为97.05±0.85%。与其他三种方法相比,UMAE-NADES提取花色苷含量高且具有用时短的优点。使用AB-8型大孔树脂对Et OH、NADES、UMAE-Et OH、UMAE-NADES提取的花色苷粗提液进行纯化与鉴定。纯化后,Et OH、NADES、UMAE-Et OH和UMAE-NADES提取的花色苷纯度分别为29.99%、32.88%、36.51%和44.89%。采用高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)对四种方法提取的黑果腺肋花楸花色苷进行种类鉴定,共鉴定出矢车菊-己糖苷二聚体、矢车菊-3-半乳糖苷、矢车菊-3-葡萄糖苷、矢车菊-3-阿拉伯糖苷、矢车菊-3-木糖苷、矢车菊-3,5-二己糖苷六种花色苷。与其他三种方法相比,UMAE-NADES提取的黑果腺肋花楸花色苷在纯化过程中提高了纯度。采用ABTS+·、FRAP、T-AOC三种抗氧化能力测定方法对四种提取方法得到的花色苷进行抗氧化性研究。结果显示黑果腺肋花楸花色苷具有清除ABTS+·自由基、还原铁离子的能力,并且花色苷的FRAP、T-AOC抗氧化能力高于同浓度VC(p<0.05)。UMAE-NADES获得的花色苷的抗氧化能力是其他三种提取方法的1-2倍,其中FRAP和T-AOC抗氧化能力分别是VC的2倍和4.2倍。因此,UMAE-NADES提取纯化后的花色苷具有最强的抗氧化性。利用脂多糖(LPS)诱导小鼠引起急性肺损伤来进行体内研究,以考察黑果腺肋花楸花色苷对ALI小鼠的抗肺炎效果。结果发现,花色苷可以显著缓解ALI小鼠的肺水肿症状,使小鼠肺组织中肺间隔及肺泡腔基本恢复正常,并与阳性对照地塞米松(DXM)修复效果相当。其主要作用机制是通过降低小鼠血清、肺组织及肺泡灌洗液(BALF)中促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,减少BALF中单核巨噬细胞数、中性粒细胞数及细胞总数,减少肺部MDA的释放、降低MPO酶活性、增加SOD酶活性,从而降低小鼠体内氧化应激反应,并抑制NF-κB相关p65信号通路以及调节IκBα/p-IκBα基因的蛋白表达。通过TUNEL染色发现花色苷可显著降低ALI小鼠体内的细胞凋亡率。这些结论表明黑果腺肋花楸花色苷可以抑制ALI小鼠的炎症反应,具有显著的抗肺炎效果。
其他文献
动物是流感病毒重要储存库,使流感病毒基因片段重配产生新型流感病毒成为可能。近年来新型重组禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)不断出现,包括H7Nx、H5Nx、H10Nx等,给家禽业和公共卫生带来很大威胁。2013年我国首次报道的低致病性H7N9亚型AIV,是不同亚型流感病毒基因重组产生的新型重组病毒,对鸡呈低致病性,但是可以感染人引起发病甚至死亡;在2016年底H7N9
该研究通过微波辅助提取法对黑果腺肋花楸果粉中的花色苷进行提取,采用响应面法优化试验条件,并通过pH值示差法测定黑果腺肋花楸果粉中花色苷的提取量,得到黑果腺肋花楸花色苷提取的最佳工艺条件为提取剂59%乙醇、液料比29∶1(mL/g)、提取温度48℃、提取时间11 min。在最佳工艺条件下,黑果腺肋花楸果粉中花色苷提取量为10.298 mg/g。
胶质母细胞瘤是目前所知的致死率最高的中枢神经系统肿瘤,已有治疗策略的临床治疗效果不佳,患者平均生存期仅为12个月左右。目前针对胶质母细胞瘤治疗的难点首先是缺乏能够对肿瘤进展和患者预后进行有效评估的生物标志物,导致难以进行精准治疗;其次,作为“种子细胞”的胶质瘤干细胞是胶质母细胞瘤侵袭性生长、治疗抵抗及发生复发的根源,然而针对胶质瘤干细胞的有效靶标较为缺乏;此外,胶质母细胞瘤患者经常会对临床治疗的一
第一章PRMT1调控急性髓细胞白血病铁死亡及作用机制背景和目的:急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)是起源于造血干/祖细胞的血液系统肿瘤。传统标准治疗虽能取得一定的疾病缓解率,但复发难治仍是目前亟待解决的难点与热点问题。深入探索AML发病机制,开发新靶点及新疗法对于提高AML缓解率及生存率具有重要意义。近年来,大量研究表明表观遗传异常在AML中具有重要作用,靶向
背景癌症患者主要的死亡原因仍然是远端转移。一旦进展到转移期,患者的5年生存率就明显下降。癌转移是一个复杂的过程,这其中牵涉了癌细胞从原发肿瘤迁移,进入循环(内渗),然后在远处器官离开循环(外渗),最后转移性定植。目前的研究证据支持肿瘤微环境参与了肿瘤的发生、发展、侵袭、转移过程。分泌蛋白是细胞分泌的最重要一类活性物质,能够通过旁分泌或远距分泌对肿瘤微环境进行修饰。SEC23A蛋白参与COPⅡ囊泡的
研究背景和目的:乳腺癌(Breast cancer,BC)是世界范围内最常见的癌症之一,是女性癌症患者死亡的主要原因。近年来我国早期乳腺癌5年生存率达到了83%左右,但转移性乳腺癌患者的5年生存率仍然很低。因此研究乳腺癌转移的分子机制有助于制定乳腺癌的治疗策略。环指蛋白6((Ring finger protein 6,RNF6)是E3泛素连接酶家族的一个成员,调控着许多对细胞生长和存活非常重要的靶
第一部分 构建Ⅰ-ⅢA期非小细胞肺癌术后患者的条件生存概率预测模型目的:目前,对于Ⅰ-ⅢA期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者的最佳术后随访策略尚无共识。本研究旨在建立基于网络的预测模型,用以预测Ⅰ-ⅢA期NSCLC术后患者癌症特异性条件生存概率(conditional probability of cancer-specific survival
恩格斯的自然辩证法体现了辩证唯物主义自然观的有机性和系统性,同时与人的历史发展相统一。马克思主义的自然辩证法具有"实践批判"导向、"目的意志"指引、"社会实践"中介的三点核心要旨。绿色发展作为自然辩证法在新历史机遇下的时代思想延伸继承了自然辩证法的核心要旨,体现了恩格斯自然辩证法思想的当代意义。
目的结直肠癌是目前世界范围内发病率及死亡率均位列第三位的恶性肿瘤。在我国,其发病率仍呈上升趋势。研究结直肠癌的发病机制是未来结直肠癌防治工作的基础。探究抑癌基因甲基化与结直肠癌发生发展关系又是目前结直肠癌发病分子机制挖掘的热门方向。故本研究旨在探讨前期通过测序技术筛选获取的TMEM196的甲基化在结直肠癌发生发展中的功能及分子机制。方法1通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome At
目的:主动DNA去甲基化酶TET家族介导的主动DNA去甲基化途径是否参与以及如何调控肿瘤放疗敏感性知之甚少。本研究致力于探究主动DNA去甲基化酶在结直肠癌辐射增敏中的作用及作用机制。以期阐明主动DNA去甲基化介导辐射增敏的新机制。方法:1.检测电离辐射和CPT处理结直肠癌细胞后TET酶家族成员(TET1、TET2、TET3)蛋白水平和mRNA表达。2.检测5种不同结直肠癌相关细胞系TET3表达与细