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第一部分高脂血症大鼠急性胰腺炎时急性肺损伤模型的建立及评价目的:明确高脂血症大鼠急性胰腺炎时胰腺组织及肺组织的损伤情况。方法:64只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法随机分为非高脂对照组（N-control组）、非高脂胰腺炎组（N-AP组）、高脂对照组（H-control组）及高脂胰腺炎组（H-AP组）,其中胰腺炎组根据取材时间细分为12h、24h、48h三个亚组,每组各8只大鼠。非高脂组大鼠普通饲料喂养14天,高脂组大鼠通过腹腔持续注射P-407（0.25g/kg,连续14天,每天1次）诱导高脂血症模型。14天后,采用腹腔两次注射L-精氨酸（2.5mg/kg/次,间隔1h）的方法诱导急性胰腺炎模型。造模完成后禁食不禁水,在相应时间点下,对大鼠进行麻醉、处死取材。收集大鼠下腔静脉血,切取适量的胰腺组织、肺组织进行固定、冻存。全自动生化仪检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、淀粉酶（AMY）、脂肪酶（LIP）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）及游离脂肪酸（FFA）的水平。各组大鼠胰腺、肺组织行石蜡包埋、切片后,进行HE染色,在光镜下观察胰腺、肺组织病理改变并进行病理评分。免疫组化法检测肺组织MLKL及IL-1β蛋白表达水平。免疫荧光法检测肺组织MPO蛋白表达水平。结果:连续14天腹腔注射P-407后,大鼠血清TG、TC及FFA水平均显著升高。肝肾功能指标结果显示,单独应用P-407不会对大鼠血清ALT、AST、Cr及BUN的水平产生明显影响。但使用L-精氨酸诱导急性胰腺炎模型后,无论高脂组还是非高脂组大鼠的肝肾功能均出现明显损伤,且随着急性胰腺炎造模时间的延长,大鼠血清ALT、AST、Cr及BUN的水平也随之显著升高;同时急性胰腺炎大鼠血清AMY及LIP水平均显著升高,光镜下可见胰腺组织出现明显的出血坏死等病理改变,肺组织出现炎性细胞浸润、肺泡壁水肿及出血等病理损伤。在同一时间点下,高脂血症性急性胰腺炎大鼠血清肝肾功能损伤,胰腺组织、肺组织的病理损伤均较非高脂血症性急性胰腺炎大鼠更为严重。免疫组化及免疫荧光结果显示,与对照组相比,急性胰腺炎造模组大鼠肺组织IL-1β、MLKL表达水平及MPO阳性细胞数量均显著升高。与N-AP组同一时间点相比,H-AP组大鼠肺组织IL-1β、MLKL表达水平及MPO阳性细胞数量均显著升高,且各指标表达水平在24h达到高峰。结论:1、以10%的P-407（浓度为0.25g/kg）,对大鼠腹腔连续注射14天,每天1次,可成功诱导高脂血症大鼠模型;2、以20%的L-精氨酸（浓度为2.5g/kg,p H值为7.0）,对大鼠连续腹腔注射2次,间隔1h,可成功诱导急性胰腺炎大鼠模型;3、发生急性胰腺炎时,高脂血症大鼠病情重于非高脂血症大鼠,且肺损伤更重;4、高脂血症大鼠急性胰腺炎相关急性肺损伤可能与肺组织程序性坏死水平相关。第二部分程序性坏死在高脂血症大鼠急性胰腺炎肺损伤中的作用目的:明确程序性坏死在高脂血症大鼠急性胰腺炎相关肺损伤中的作用。方法:56只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法随机分为非高脂对照组（N组）、非高脂胰腺炎组（N-AP组）、高脂对照组（H组）、高脂胰腺炎组（H-AP组）及Nec-1干预组（H-APN组）,其中Nec-1干预组根据Nec-1剂量的不同再细分为0.82mg/kg（H-APNL组）、1.65 mg/kg（H-APNM组）及3.30 mg/kg（H-APNH组）三个亚组,每组各8只大鼠。Nec-1干预组大鼠在诱导高脂血症模型后,于急性胰腺炎造模前1h分别予以各剂量的Nec-1进行腹腔注射,其余造模方法同第一部分。造模完成后禁食不禁水,24h后对大鼠进行麻醉、处死取材。收集下腔静脉血,切取适量的胰腺组织、肺组织进行固定、冻存。全自动生化仪检测血清淀粉酶（AMY）及脂肪酶（LIP）的水平。各组大鼠胰腺、肺组织行石蜡包埋、切片后,进行HE染色,在光镜下观察胰腺、肺组织病理改变并进行病理评分。免疫组化法检测肺组织RIP1、RIP3、MLKL及IL-1β蛋白表达水平。Western Blot法检测肺组织RIP1、RIP3及MLKL蛋白表达水平。免疫荧光法检测肺组织MPO蛋白表达水平。q RT-PCR法检测肺组织TNF-α及NF-κB的表达水平。结果:与N组相比,N-AP组大鼠血清AMY及LIP水平均显著升高,胰腺及肺组织病理损伤更重,病理评分也更高,同时肺组织RIP1、RIP3、MLKL、IL-1β蛋白表达水平,TNF-α、NF-κB的表达水平及MPO阳性细胞数量均更高。HAP组大鼠以上指标较N-AP组大鼠进一步升高。而给予程序性坏死抑制剂Nec-1预处理后,高脂血症性急性胰腺炎大鼠肺组织程序性坏死关键蛋白RIP1、RIP3及MLKL表达水平显著降低,胰腺及肺组织病理损伤明显改善,病理评分显著降低,IL-1β蛋白表达水平及MPO阳性细胞数量,TNF-α、NF-κB的表达水平也显著降低。结论:1、发生急性胰腺炎时,高脂血症大鼠肺损伤较非高脂血症大鼠肺损伤更重的原因与肺程序性坏死水平相关;2、发生急性胰腺炎时,使用Nec-1可以抑制大鼠肺组织程序性坏死水平,进而减轻大鼠肺组织病理损伤程度及降低肺组织炎症反应水平,从而发挥对肺部的保护作用。第三部分程序性坏死介导的巨噬细胞极化在高脂血症大鼠急性胰腺炎相关肺损伤中的机制探讨目的:探讨程序性坏死在高脂血症大鼠急性胰腺炎相关肺损伤中的作用及可能机制。方法:40只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法随机分为非高脂对照组（N组）、非高脂胰腺炎组（N-AP组）、高脂对照组（H-N组）、高脂胰腺炎组（HAP组）及Nec-1干预组（H-APN组）,每组各8只大鼠。根据第二部分的结果,H-APN组大鼠在急性胰腺炎造模前1h予以1.65mg/kg剂量的Nec-1腹腔注射,其余造模方法同第一部分。造模完成后禁食不禁水,24h后对大鼠进行麻醉、处死取材。切取适量的肺组织进行固定、冻存。免疫荧光法检测肺组织CD68、CD68+/TLR4、CD68+i NOs+、CD68+CD206+及IL-10蛋白表达水平。Western Blot法检测肺组织IL-6、TLR4、JNK、p-JNK、P38及p-P38蛋白表达水平。结果:与N组相比,N-AP组大鼠肺组织CD68蛋白表达水平、CD68+iNOs+细胞数量及IL-6蛋白表达水平均显著升高,而CD68+CD206+细胞数量及IL-10蛋白表达水平均显著降低,TLR4-JNK/P38信号通路活化。H-AP组大鼠肺组织CD68蛋白表达水平,CD68+i NOs+细胞数量及IL-6蛋白表达水平较N-AP组大鼠进一步升高,而CD68+CD206+细胞数量及IL-10蛋白表达水平进一步降低,TLR4-JNK/P38信号通路明显活化。经Nec-1预处理后,高脂血症性急性胰腺炎大鼠肺组织CD68蛋白表达水平,CD68+i NOs+细胞数量及IL-6蛋白表达水平均显著降低,而CD68+CD206+细胞数量及IL-10蛋白表达水平均显著升高,TLR4-JNK/P38信号通路活化水平显著降低。结论:1、发生急性胰腺炎时,与非高脂血症大鼠相比,高脂血症大鼠肺组织巨噬细胞向促炎方向极化;2、使用Nec-1抑制高脂血症大鼠肺程序性坏死水平后,肺TLR4-JNK/P38信号通路活化水平也随之下降,可能导致肺巨噬细胞向抑炎方向极化,进而减轻高脂血症大鼠急性胰腺炎时急性肺损伤程度。