【摘 要】
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幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种寄存于人胃黏膜上的革兰氏阴性菌,目前众多的研究证实它与胃肠道疾病密切相关,并且已被世界卫生组织列为一类致癌因子。临床上治疗Hp的感染,多采用抗生素多联疗法,但维持时间短,而且长期用药容易造成肠道菌群混乱和耐药性的增加,从而导致治疗Hp的感染更加困难。基于此,本研究拟制备抗Hp的卵黄免疫球蛋白并开发抗Hp代餐粉。利用实验室摇瓶发酵和发酵
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幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种寄存于人胃黏膜上的革兰氏阴性菌,目前众多的研究证实它与胃肠道疾病密切相关,并且已被世界卫生组织列为一类致癌因子。临床上治疗Hp的感染,多采用抗生素多联疗法,但维持时间短,而且长期用药容易造成肠道菌群混乱和耐药性的增加,从而导致治疗Hp的感染更加困难。基于此,本研究拟制备抗Hp的卵黄免疫球蛋白并开发抗Hp代餐粉。利用实验室摇瓶发酵和发酵罐发酵探究UreB、BabA2和FlaA三种基因工程菌的高密度发酵条件。结果显示三种工程菌的最佳发酵条件为:在30 L发酵罐中以TB培养基为发酵培养基,接种量为5%,发酵温度为37℃,pH为6.8,溶氧量为30%左右,培养至2h开始恒速流加50%甘油,4 h流加50%酵母提取物和50%胰蛋白胨,并加入浓度为0.5mmol/L的IPTG,诱导表达4 h,结束发酵。所得菌体湿重约为28.6 g/L,表达量为31.4%。将纯化后的UreB、FlaA和BabA2三种抗原免疫产蛋鸡后,通过水稀释盐析法获得的多价卵黄免疫球蛋白(multivalent yolk antibody,mIgY)纯度达95%以上,当稀释度达1:150000时,仍能检测到信号,在体外可有效抑制Hp的生长。通过冷冻喷雾干燥技术获得高免蛋粉,将其与其他配料混合获得抗Hp的卵黄免疫球蛋白代餐粉,并对其冲调性进行优化。结果表明当麦芽糊精添加量为20%,木糖醇添加量为10%,高免蛋粉添加量为15%时,冲调性最佳,在体外60 mg/mL的卵黄免疫球蛋白代餐粉可有效抑制Hp的生长。通过小鼠体内实验,初步评估卵黄免疫球蛋白代餐粉的有效性。结果表明小鼠于第8周感染Hp,体重减轻,血清中Hp抗体效价升高,胃内分离并鉴定出Hp,胃体充血萎缩。经代餐粉灌喂一个月后,小鼠体重接近正常小鼠,血清中Hp抗体效价明显降低,胃体充盈呈茄子状,接近正常胃体。本研究成功制备出抗Hp的卵黄免疫球蛋白并开发出抗Hp代餐粉。
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