抗体是一种重要的疾病诊断标志物,并成为诊治疾病的关键分子。同时,抗体筛查在应对突发性的流行病、监测慢性疾病进展、评估抗体药物疗效等方面具有重要作用。但是,在疾病早期,人体液中的抗体丰度较低,在窗口期之内往往无法检测到抗体。另外,目前大多数抗体检测方法操作复杂,需要精密的实验仪器;甚至有些方法需要固定抗原使抗原变性,表位掩盖,敏感性降低,从而延误了诊断和治疗。均相比色检测方法因其简单、直观、快速的特点,非常适合于疾病早期抗体的即时检测。因此本论文利用化学结构稳定、价格适宜的DNA及其高度的可控性和精确组装的特性,提出了两种基于DNA酶组装的抗体检测新方法,实现了抗体的简单快速、准确灵敏的分析。具体内容如下:1.基于双头DNA酶组装的高灵敏比色法在论文的这一部分工作中,我们借助催化发卡组装（catalytic hairpin assembly,CHA）构建了灵敏的比色法一步检测抗体。我们设计了三种发卡结构H1、H2和H3,其中H1两个末端由抗原标记,并且以Anti-DIG Ab和Anti-DNP Ab为例进行了研究。结果表明,由于抗体的两个识别位点间距为～120（?）,当抗原与抗体结合后,破坏了H1结构,暴露出引发催化发卡组装的引物链,继而催化H2和H3组装形成许多两端带有G-四链体的杠铃型结构,在加入氯化血红素（hemin）和3,3’,5,5’-四甲基联苯胺（TMB）后产生颜色变化。这种灵敏的比色法快速简单,可实现一步检测抗体,有望用于抗体的快速筛查。该方法的通用性也很强,可通过替换识别元件实现对二价靶标的快速灵敏检测。同时,我们还借助这一方法实现了抗体的联合检测,为提高传统抗体检测试剂盒的准确性和灵敏度提供了思路。2.基于串联重复DNA酶组装的高灵敏比色法低丰度抗丙型肝炎病毒抗体（Anti-HCV Ab）的早期检测对于有效诊断和治疗HCV感染至关重要。在这一部分工作中,我们建立了另外一种比色法用于抗体的灵敏检测,并使用这种方法测定了血清样品中的Anti-HCV Ab。在该方法中,我们巧妙地利用抗体的刚性结构诱发DNA链置换,并与滚环扩增（rolling circle amplification,RCA）相结合,从而在“Y”形抗体的臂上产生大量串联重复的G-四链体,因此,加入hemin以后,就可以形成具有过氧化物酶活性的DNA酶催化TMB的氧化,从而放大比色信号。实验结果证明RCA反应和DNA酶催化反应的双重信号放大使得该检测方法非常灵敏并可以检测到0.998 p M抗体。进一步实验发现,该方法可以用作简便、灵敏地检测血清样品中Anti-HCV Ab的有效方法。此外,该方法改进了以往报道的需要抗体诱发DNA构象变化的检测方法,因而无需严格控制两个抗原之间的探针长度,从而打破了对抗原大小的限制,因此通用性更强。