【摘 要】
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黑籽南瓜（Cucurbita ficifolia Bouché）具有多种生物活性,具有广阔的开发前景。本文以黑籽南瓜作为原材料,采用超声波法辅助提取黑籽南瓜黄酮类化合物,响应面法优化提取工艺;大孔吸附树脂对黑籽南瓜黄酮类化合物进行分离纯化;利用高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS/MS）技术分析其组成成分;基于网络药理学及分子对接技术对黑籽南瓜黄酮类化合物的减肥机制进行分析;考察黑籽南瓜黄酮类化
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黑籽南瓜（Cucurbita ficifolia Bouché）具有多种生物活性,具有广阔的开发前景。本文以黑籽南瓜作为原材料,采用超声波法辅助提取黑籽南瓜黄酮类化合物,响应面法优化提取工艺;大孔吸附树脂对黑籽南瓜黄酮类化合物进行分离纯化;利用高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS/MS）技术分析其组成成分;基于网络药理学及分子对接技术对黑籽南瓜黄酮类化合物的减肥机制进行分析;考察黑籽南瓜黄酮类化合物的生物活性。研究结果如下:通过单因素实验确定了影响因素,响应面法优化了提取工艺:超声功率250 W,乙醇体积分数70%,超声时间50 min,料液比1:20 g/m L,黑籽南瓜黄酮化合物的提取率可达到3.531%;采用AB-8型大孔树脂对黑籽南瓜黄酮类化合物进行纯化,工艺条件为:上样流速1.0 m L/min、上样溶液p H3.0、洗脱溶液为体积分数80%的乙醇、洗脱流速为1.0 m L/min,在该条件下黑籽南瓜黄酮化合物的提取率为4.517～4.609%。通过HPLC-MS/MS对其组成成分进行分析,得出黄酮类化合物共6种,分别为槲皮素、芦丁、大波斯菊苷、木犀草素-7-O-葡萄糖甙、金丝桃苷、甲基条叶蓟素,其中槲皮素含量最高,为45%。采用网络药理学方法对黑籽南瓜黄酮类化合物的活性成分、潜在靶点和分子机制进行预测。构建黄酮类化合物与肥胖的“成分-靶点-通路”的互作网络,包括药物相似性评估、口服生物利用度预测、蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络构建和分析、基因本体论（GO）术语和反应组通路注释。最终确定了黑籽南瓜黄酮类化合物的5种活性成分调控肥胖相关的5个关键靶点与8条主要信号通路,GO生物富集分析结果显示黑籽南瓜黄酮类化合物减肥主要涉及调控与肥胖相关的氧化还原反应、炎症反应以及前脂肪细胞的增殖、周期、分化等。利用分子对接模拟方法进一步说明了配体的活性位点和结合程度,解释了其可能的作用机制。结果表明核心靶点与化合物木犀草素-7-O-葡萄糖甙、大波斯菊苷等具有较高的结合能。通过自由基清除实验考察了黑籽南瓜黄酮类化合物的抗氧化性,并且抗氧化能力随黄酮类化合物浓度增加而增强;通过体外细胞实验表明黑籽南瓜黄酮类化合物可以抑制脂多糖（LPS）诱导的小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）分泌一氧化氮（NO）及前列腺素E2（PGE2）,证明其具有抗炎活性,并且抗炎能力与黑籽南瓜黄酮类化合物的浓度成正比;黑籽南瓜黄酮类化合物能够有效抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖、诱导其凋亡,对其分裂间期起到阻滞作用,有效抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,抑制脂肪的产生。分别用50μg/m L、100μg/m L、200μg/m L、400μg/m L的黑籽南瓜黄酮类化合物处理细胞,试验证明细胞中脂肪量相应的减少了10.57%,14.2%,19.5%,26.7%,与空白对照组相比,具有显著差异。
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