氟喹诺酮(fluoroquinolones, FQs)是第三代喹诺酮类药物，也是近20年来发展最快、研究最多的一类化学合成的抗生素，因其具有抗菌谱广、低毒、高效等特点,而广泛应用于人类临床与畜牧渔养殖业中。FQs类抗菌药为人兽共用药，动物体内药物残留通过食物链进入人体,对人类健康直接产生危害,可以导致细菌耐药性产生，并诱导癌变。因此，世界各国对FQs类抗菌药在动物源性食品中的残留制定了最高残留限量标准（10-1900μg/Kg）。由于FQs药物种类繁多，建立该类药物多残留检测方法有利于高效、快速的控制动物性产品质量安全，因此FQs药物多残留检测方法是目前的研究热点和趋势。基于此，本研究经过大量的试验，研制成功了FQs多残留检测试剂盒和胶体金免疫试纸。在分析FQs类药物分子结构和免疫原性基础上，采用二环己碳二亚胺（DCC）法将Nor（因Nor的结构是多种FQs类药物的母核结构）分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）进行连接制备免疫抗原（Nor-BSA）和包被抗原（Nor-OVA）。并利用紫外扫描、SDS-PAGE电泳及动物免疫等方法进行鉴定。结果表明，动物免疫产生的多抗血清能和FQs发生特异性反应，而与其他种类的药物不发生交叉反应。结合紫外扫描和SDS-PAGE电泳鉴定结果，证明Nor和载体蛋白成功偶联。为下一步FQs的抗体制备奠定了基础。用制备的Nor-BSA免疫新西兰大白兔，经过8次免疫后采血，采用间接ELISA测定多抗血清效价，阻断ELISA测定其敏感性及特异性。结果表明，兔多抗血清的效价在1:1.92×105至1:7.68×105之间；IC50最低为8.97μg/L；多抗血清能和FQs发生特异性反应，而与其他种类的药物不发生交叉反应。用制备的Nor-BSA免疫Balb/C小鼠，筛选出用于血清效价高的小鼠用于细胞融合，建立杂交瘤细胞株，利用杂交瘤细胞诱导腹水制备单抗并鉴定其性能。结果表明，共筛选出2株效价高、亲和力强的杂交瘤细胞1A3-D7和3E5-C6，染色体平均99条；制备的单抗亚型均为为IgG1/κ，腹水分别达到了1:2.56×105和1:1.024×106，Ka分别为3.63×109和3.86×109L/moL，3E5-C6产生的单抗IC50为5.50μg/L，单抗只和FQs发生特异性反应，而与其他种类的药物不发生交叉反应。基于所制备的FQs mAb，利用棋盘法确定FQs mAb、Nor-OVA及酶标抗体工作浓度，研制出FQs残留检测ELISA试剂盒并测定其性能。结果表明，所制备的两种ELISA试剂盒只和FQs发生特异性反应，而与其他种类的药物不发生交叉反应；经典阻断ELISA试剂盒的IC50为4.61μg/L，快速阻断ELISA试剂盒的IC50为6.27μg/L；两种试剂盒的准确度、精密度、保存期基本一致；与LC-MS-MS检测结果基本一致。基于所制备的FQs mAb，利用胶体金标记和膜免疫层析技术研制出FQs多残留检测试纸条并鉴定了其性能。结果表明，该试纸条对Nor和Pei的目测灵敏度为50ng/mL、对Lom的目测灵敏度为40ng/mL；试纸对Nor的机读灵敏度（B/B0＝80%）为2.519ng/mL、对Lom的机读灵敏度（B/B0＝80%）为1.533ng/mL、对Pei的机读灵敏度（B/B0＝80%）为2.394ng/mL；该试纸与其他抗生素无交叉反应；试纸检测50份阴性样品的假阳性率为0，检测72份阳性样品假阴性率为0；不同批次的试纸批内变异系数和批间变异系数均小于10%；试纸的有效期大于12个月；试纸的检测结果LC-MS-MS方法的检测结果基本一致。