【摘 要】
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目的:建立简单经济有效的体外培养人角膜上皮细胞的方法,并观察其体外生长的生物学特性。
方法:1、在无菌条件下取人角膜缘,剪成小块,种植于六孔板中。长至80％融合后将组
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目的:建立简单经济有效的体外培养人角膜上皮细胞的方法,并观察其体外生长的生物学特性。
方法:1、在无菌条件下取人角膜缘,剪成小块,种植于六孔板中。长至80％融合后将组织块重新种植于新的培养板中,贴壁细胞消化后传代。2、观察细胞生长情况,细胞形态,拍照记录。3、用免疫细胞化学的方法检测细胞对角膜上皮特异性角蛋白AE1单克隆抗体的表达。4、MTT比色法测定细胞的生长情况,并绘制生长曲线。5、统计学分析结果。
结果:1、人角膜缘组织块24h贴壁,48～72h后即可见有细胞自角膜缘爬出,7d后达到融合,细胞传代至第5代后体积明显变大,细胞衰老。重复种植培养出的角膜上皮细胞形态没有明显变化。2、人角膜上皮细胞免疫细胞化学显示角蛋白AE1单克隆抗体阳性。3、MTT生长曲线显示:人角膜上皮细胞生长曲线呈近似“S”形,细胞第3d进入对数生长期。4、统计学分析:首次种植与重复种植后培养出的细胞增殖能力及活性无明显差异(P＞0.05)。
结论:角膜缘组织块重复种植培养法可获得大量具有良好生物学特性的角膜上皮细胞。
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