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目的:采用实时荧光定量PCR的方法检测nucleostemin(NS)、pokemon基因在白血病患者骨髓有核细胞、多种肿瘤细胞株及胃癌组织中的表达水平。研究通过对U937细胞中NS基因的干扰，评价其抗肿瘤生长的效果。
方法:通过RT-PCR，T-A克隆，Real-time PCR等方法精确测定并比较NS、pokemon基因在白血病患者骨髓有核细胞、多种肿瘤细胞株：人结肠癌细胞株(SW480)、人胃癌细胞株(SGC-7901)、人肺癌细胞株(LTEP-a-2)、人髓系白血病细胞株(U937)、人前列腺癌细胞株(PC3)、人宫颈癌细胞株(Hela)及胃癌组织中的表达水平。体外化学合成针对NS基因的小干扰RNA片段(siRNA)，设计并构建NS基因的RNAi腺病毒载体pshuttle-H1；用脂质体转染方法将siRNA转染293A细胞，包装获取腺病毒，体外转染U937肿瘤细胞。以转入不含siRNA片段的空载体backbone-pshuttle的U937肿瘤细胞作对照，实时定量PCR及Western blot检测siRNA的抑制效应；流式分析测定细胞周期变化。
结果:慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓有核细胞中NS的表达显著高于对照组(P＜0.05)；U937中NS的表达量明显高于对照组内皮细胞株UEVC-304(P＜0.05)；急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓有核细胞中pokemon的表达显著高于急性粒细胞白血病(AML)、慢性粒细胞白血病(CML)及对照组(P＜0.05)；SW480中pokemon的表达量明显高于SGC、LTEP、U937、PC3、Hela和对照组UEVC-304(P＜0.05)。胃癌组织NS及pokemon表达量均高于癌旁组织，阳性率为71.4％(5/7)。实时定量PCR检测干扰后U937细胞中NS的表达明显低于对照组backbone-pshuttle(p＜0.05，n=3)；Western blot检测证明干扰组U937中NS的表达比backbone-pshuttle显著减低(p＜0.05，n=3)；细胞周期无明显变化。
结论:所建立的NS、pokemon基因表达的real-time PCR检测方法具有稳定、准确等特点，NS、pokemon基因可以作为某些肿瘤的一个新的治疗监测靶点，其表达水平的检测可作为判断某些肿瘤发生发展的参考指标。腺病毒介导RNAi技术能有效抑制白血病细胞株(U937)表达NS，为应用RNAi抑制肿瘤细胞生长提供新的证据。