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地黄是一种大宗常用中药材,以鲜地黄、生地黄和熟地黄三种形式入药,三者在性味、功效和主治方面差异显著,是中药材经加工炮制而药性发生改变的典型。 梓醇和水苏糖是鲜地黄的主要成分,其在产后加工过程中大幅度降解,不同商品生地中两者含量差异很大,严重影响其临床疗效。其原因可能是由于产后加工工艺不合理造成的。传统上鲜地黄是通过烘焙干燥,这种工艺的科学性有待证实。生产上有先低温后高温和先高温后低温两种烘焙模式,究竟哪种模式更为科学目前尚不明确。本文认为鲜地黄可能含有β-葡萄糖苷酶(β-Glu)和α-半乳糖苷酶(α-Gal),烘焙的目的是使这两种酶灭活,从而保留更多的有效成分。 为验证这一假说,本文开展了以下研究工作: 1.以HPLC-ELSD法测定了地黄不同炮制品中梓醇和主要糖的含量,结果表明:所测鲜地黄中水苏糖、蔗糖和梓醇含量较高,分别为42.69%、17.33%和5.43%;60℃烘焙干燥后分别下降至20.35%、16.24%和3.86%;在蒸制过程中,定时取样,发现三者含量进一步下降,16h后已不能检出。甘露三糖和果糖在地黄加工炮制过程中含量逐渐上升,分别由鲜地黄的0.64%和0.18%,上升至生地黄的1.05%和1.17%,在蒸制16h的熟地黄中其含量已分别达14.19%和12.49%。 蒸制16h的熟地黄外观已达“黑如漆”的传统质量标准,其HPLC图谱不再发生显著变化,故认为常压蒸制16h可作为熟地黄的炮制终点,并可以甘露三糖作为熟地黄的质量控制标准。 2.通过磷酸盐缓冲液提取、硫酸铵盐析和凝胶柱层析,证明鲜地黄中含有一种β-Glu和三种α-Gal的同工酶。对初步纯化的酶液进行性质研究,结果表明:β-Glu热稳定性较差,在50℃下即迅速失活;α-Gal在50℃条件下,其总酶活性