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目的:
通过建立免疫低下肺部感染小鼠模型,探讨清肺培元颗粒对免疫低下肺部感染小鼠的免疫功能以及肺功能的影响,阐述清肺培元颗粒对防治免疫低下肺部感染的作用机理,为清肺培元颗粒临床应用以及疗效评价提供实验依据。
方法:
1 动物分组:将 90 只清洁级近交系 BALB/c 雌性小鼠,随机分为九组,每组 10只,即正常对照组、Friend鼠白血病病毒组(FLV组)、模型组、齐多夫定组(AZT组)、唐草片组、清肺培元颗粒加左氧氟沙星组(中西药组)、清肺培元颗粒高剂量组、清肺培元颗粒中剂量组、清肺培元颗粒低剂量组。
2 动物造模与用药:适应性喂养 3d 后,除正常组外其他各组腹腔注射 0.5ml 的FLV 病毒悬液,观察 21d,21d 后鼻腔滴注Ⅲ型肺炎链球菌,建立免疫低下肺部感染小鼠模型。根据体表面积换算法计算出各组小鼠的给药剂量,在造模成功1d后,各组小鼠每天灌胃给予相应的药物干预,正常对照组、FLV组、模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)水灌胃,给药体积为0.2ml·10g-1,其它治疗组给予相应的药物灌胃。末次给药前12小时动物禁食,不禁水。
3 指标测定:实验中观察记录小鼠的一般状况,末次给药 6小时后,摘眼球取血,处死解剖小鼠取胸腺、脾脏及肺脏,并称胸腺及脾脏的质量,计算胸腺指数、脾脏指数;用流式细胞仪检测 T 淋巴细胞亚群百分比即 CD4+T 淋巴细胞百分比、CD8+T 淋巴细胞百分比,计算 CD4/CD8 比值。酶联免疫吸附法检测小鼠血清中IL-12、TNF-α含量,光镜下观察小鼠肺组织苏木素-伊红(HE)染色后病理学改变。
结果:
1 成功复制免疫低下肺部感染小鼠模型,各治疗组可明显改善小鼠的一般状态。
2 对免疫低下肺部感染小鼠体重的影响:与模型组相比,除清肺培元颗粒低剂量组外,清肺培元颗粒高剂量组、清肺培元颗粒中剂量组以及其他各治疗组均能一定程度的增加小鼠体重,差异有统计学意义(P<0.05)。与 FLV 组相比,清肺培元颗粒高剂量组、AZT组、中西药组、唐草片组均能一定程度的增加小鼠体重,差异有统计学意义(P<0.05)。
3 对免疫低下肺部感染小鼠胸腺质量、胸腺指数的影响:与模型组相比,正常组的胸腺质量及胸腺指数较模型组数值高,除清肺培元颗粒低剂量组外,清肺培元颗粒高剂量组、清肺培元颗粒中剂量组以及其他各治疗组在一定程度上均能增加胸腺质量及胸腺指数,差异有统计学意义(P<0.05)。与 FLV 组相比,清肺培元颗粒高剂量组、清肺培元颗粒中剂量组以及其他各治疗组均能一定程度的增加胸腺质量,差异有统计学意义(P<0.05)。与 FLV组相比,AZT 组、清肺培元颗粒高剂量组、中西药组均能一定程度的增加胸腺指数,差异有统计学意义(P<0.05)。
4 对免疫低下肺部感染小鼠脾脏质量、脾脏指数的影响:与模型组相比,除清肺培元颗粒低剂量组外,清肺培元颗粒高剂量组、清肺培元颗粒中剂量组以及其他各治疗组均能降低脾脏质量、脾脏指数,差异显著,有统计学意义(P<0.01)。与FLV组相比,清肺培元颗粒高剂量组、清肺培元颗粒中剂量组、AZT组、中西药组、唐草片组均能降低脾脏质量、脾脏指数,差异有统计学意义(P<0.05)。与AZT组相比,清肺培元颗粒高剂量组、清肺培元颗粒低剂量组及其他治疗组降低脾脏质量、脾脏指数的程度较低,差异显著,有统计学意义(P<0.01)。
5 对免疫功能低下肺部感染小鼠T淋巴细胞的影响:①与模型组相比,除清肺培元颗粒低剂量组外,清肺培元颗粒高剂量组、清肺培元颗粒中剂量组以及其他各治疗组均有升高 CD4+T淋巴细胞百分比、CD4 /CD8比值的作用,差异有统计学意义(P<0.05);与AZT组相比,清肺培元颗粒低剂量组升高CD4+T淋巴细胞百分比、CD4/CD8比值的程度较AZT组低,差异有统计学意义(P<0.05)。与FLV组相比,清肺培元颗粒高剂量组、清肺培元颗粒中剂量组、AZT组、中西药组、唐草片组均能升高CD4+T淋巴细胞百分比、CD4 /CD8比值,差异有统计学意义(P<0.05);②与模型组相比,清肺培元颗粒高剂量组、清肺培元颗粒中剂量组以及其他各治疗组均有降低CD8+T淋巴细胞百分比的作用,差异有统计学意义(P<0.05);其他各治疗组间无明显差异。与 FLV 组相比,清肺培元颗粒高剂量组、清肺培元颗粒中剂量组及其他治疗组均能降低CD8+T淋巴细胞百分比,差异有统计学意义(P<0.05)。
6 对免疫功能低下肺部感染小鼠 IL-12 的影响:与模型组相比,除清肺培元颗粒低剂量组外,清肺培元颗粒高剂量组、清肺培元颗粒中剂量组以及其他各治疗组均有升高IL-12的作用,差异有统计学意义(P<0.05);与中西药组相比,其余各治疗组升高 IL-12程度较中西药组低,差异有统计学意义(P<0.05)。与FLV组相比,清肺培元颗粒高剂量组、清肺培元颗粒中剂量组、AZT组、中西药组、唐草片组均能升高IL-12的含量,差异有统计学意义(P<0.05)。
7 对免疫功能低下肺部感染小鼠TNF-α的影响:与模型组相比,清肺培元颗粒高剂量组、清肺培元颗粒中剂量组以及其他各治疗组TNF-α含量均下降,差异有统计学意义(P<0.05);与中西药组相比,模型组 TNF-α含量高,清肺培元颗粒中剂量组、清肺培元颗粒低剂量组、AZT 组、唐草片组较中西药组 TNF-α含量下降幅度低,差异有统计学意义(P<0.05)。
8 小鼠肺病理改变可见:模型组肺内可见细支气管上皮细胞出现纤毛倒伏、细胞变性坏死等损伤性改变,伴炎症反应;其周围肺泡腔内见少量浆液、纤维素渗出及红细胞漏出,肺泡壁明显增厚,甚至肺泡完全闭塞,可见大量中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞渗出。各治疗组病理学改变较模型组轻,其中以清肺培元颗粒高剂量组、清肺培元颗粒中剂量组、中西药组改善明显。
结论:
1 成功建立免疫低下肺部感染小鼠模型,用于观察复方中药对免疫功能低下肺部感染小鼠的影响。
2 清肺培元颗粒不仅能够改善小鼠的一般症状,增加体重,也能使主要的免疫器官胸腺、脾脏的质量以及指数有所增加和降低,提示本中药制剂对免疫器官有调节作用。
3 清肺培元颗粒有效地调节小鼠外周血T淋巴细胞亚群的水平,提示清肺培元颗粒具有提高机体免疫力的作用。
4 清肺培元颗粒可以提高免疫功能低下肺部感染小鼠的 IL-12 含量,降低TNF-α含量,提示本中药制剂具有抑菌抗炎的作用。