脊神经后根端侧吻合修复大鼠阴茎感觉传入通路的实验研究

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目的:建立脊神经后根端侧吻合修复大鼠阴茎感觉传入通路的动物模型,利用神经示踪技术和形态学研究等方法探究该手术方案的可行性。方法:将40只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为实验组(n=20)、损伤组(n=10)、假手术组(n=10)三组。其中实验组大鼠右侧腰6(L6)后根切断后与腰4(L4)后根端侧吻合,损伤组右侧L6后根切断并结扎断端,两组大鼠右侧骶1(S1)后根和左侧阴茎背神(DNP)经均切断并结扎。假手术组仅作手术切口,不对神经造成损伤。4个月后,通过霍乱毒素B亚基(CTB)跨神经节追踪、CTB+荧光金(FG)双重神经示踪探索该手术重建阴茎感觉通路的可行性,通过测定反射性勃起产生的海绵体内压探究重建的感觉通路对反射性勃起功能的影响。同时,采用再生神经形态观察、神经组织学染色、透射电镜超微结构观察以及免疫荧光染色等方法,进一步评估受体神经L6后根的再生情况。结果:神经示踪研究结果显示,实验组L4脊髓后角板层Ⅰ~Ⅳ均发现阳性神经元,并以Ⅲ,Ⅳ层为主,而L6节段内并未发现标记神经元。在顺行+逆行双重神经示踪实验中,我们在实验组和假手术组L6 DRG冰冻切片中均发现了 FG单标神经元、FG-CTB双标阳性神经元,而损伤组未见FG单标、FG-CTB双标阳性神经元。刺激右侧DNP后,除假手术组外,其余两组都未检测到海绵体内压升高。大体标本观察可见实验组L4、L6后根形态均正常,吻合口神经连接良好。甲苯胺蓝染色和轴突计数表明实验组再生轴突数量和密度均显著高于损伤组(P<0.001),但分布较为不均,且低于假手术组(P<0.001),这与免疫荧光染色结果一致。电镜观察显示实验组再生轴突形态和髓鞘厚度正常,与假手术组相近,损伤组轴突变性、髓鞘变薄。结论:本实验初步证明了脊神经后根端侧吻合术修复大鼠阴茎感觉传入通路的可行性,为恢复脊髓损伤或脊柱裂硬脊膜膨出病变后阴茎感觉功能障碍提供了新的手术思路。
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