背景:阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种以记忆力减退、多重认知异常和智能障碍为特征的进行性退行性疾病,严重影响患者的生活质量,目前临床诊断需要结合患者的临床症状、体征、智能量表、脑脊液生物标记物、正电子发射型计算机断层显像(Positron Emission Computed Tomography,PET)成像等,然而由于腰穿为有创性操作,临床实施较为困难,PET的辐射性及其昂贵的价格,限制了其在临床的应用,所以AD的诊断大多还是以临床诊断为主。越来越多的研究表明,AD患者出现临床症状前就有神经病理及生物标记物的变化,因为目前没有有效的治疗AD的药物,对于中晚期的患者症状改善效果不明显,给患者及其家属带来了很多困难,所以迫切地需要更好的生物标记物来为AD的早期诊断提供帮助。外泌体是一种由多种细胞分泌的纳米级细胞外小泡,大量存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)和母乳等。外泌体可以自由穿过血脑屏障(blood brain barrier,BBB),并通过肾脏到达尿液。研究显示,外泌体可以在细胞间传播有毒的淀粉样β蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)和过度磷酸化的tau,导致神经元丢失,促进AD的发病。所以,我们可以认为从血浆及尿液中提取的外泌体在一定程度上可以反应大脑环境的变化,从而有利于AD的早期诊断。目的:探讨AD患者血浆和尿液外泌体的形态、数量以及病理蛋白水平Aβ、tau与匹配的健康对照之间的差异,判断血浆和尿液外泌体是否可为AD的早期诊断提供一些依据。方法:于2018年5月1日以后,从河南省人民医院神经内科收集30例50-80岁AD患者的血浆标本,同时从体检中心收集30例与AD患者性别、年龄、文化程度、地区匹配的正常人的血浆标本。同时另外收集30例50-80岁AD患者的尿液标本,以及30例与AD患者性别、年龄、文化程度、地区匹配的正常人的尿液标本。对所有受试者行磁共振(Magnetic Resonance Imaging,MRI)以及认知功能量表蒙特利尔认知评估(Montreal Cognitive Assessment,Mo CA)和简易智力状态检查量表(Mini-mental State Examination,MMSE)检查,判断AD患者所处的疾病阶段为中重度阶段。利用免疫沉淀技术分别提取受试者的血浆和尿液中的外泌体,用透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)和纳米粒子跟踪分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)对外泌体的形态和数量进行观察和分析。采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测AD患者和匹配的健康对照者血浆和尿液外泌体中病理蛋白P-S396-tau和Aβ1-42(经CD63标准化)的水平。结果:AD患者的血浆外泌体中CD63蛋白水平与健康对照者无明显差异(p=0.514>0.05),经CD63标准化的病理蛋白P-S396-tau和Aβ1-42的水平高于健康对照者,差异具有统计学意义(p=0.002<0.05,p=0.043<0.05),AD患者的血浆外泌体直径小于健康对照者,差异具有统计学意义(p=0.048<0.05),AD患者直径范围为30-150 nm的血浆外泌体的数量总体上大于健康受试者,但差异无统计学意义(P=0.167>0.05)。AD患者的尿液外泌体中CD63蛋白水平与健康对照者无明显差异(p=0.191>0.05),经CD63标准化的病理蛋白P-S396-tau和Aβ1-42的水平显著高于匹配的健康对照者,差异具有统计学意义(p=0.024<0.05,p=0.040<0.05),AD患者直径范围为30-150nm的尿液外泌体数量多于匹配的健康对照者,差异具有统计学意义(P=0.049<0.05),AD患者尿液外泌体直径的众数水平总体上大于匹配的健康对照组,但差异不具有统计学意义(p=0.272>0.05)。结论:相对于匹配的健康对照组,AD患者的血浆外泌体中病理蛋白P-S396-tau、Aβ1-42水平较高,外泌体直径较小。相对于匹配的健康对照组,AD患者的尿液外泌体中病理蛋白P-S396-tau、Aβ1-42水平较高,外泌体的数量相对较多。这些差异可能为AD的早期诊断提供依据,进一步有利于AD的早期治疗,促进AD的研究进展。