三种中药成分的提取及其抗结核作用的初步研究

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目的:近年来,随着结核杆菌耐药性的加重及多耐药结核杆菌的出现,以及艾滋病的广泛流行和人类自身免疫力的下降,使得结核病再次成为危害人类健康的头号公敌。目前,人类控制结核病的主要手段是化学治疗,但由于耐药性的不断增加,化学药物治疗结核病逐渐失去效力。因此,从我国丰富的中药资源中寻找毒副作用小、不易产生耐药性的抗结核中药具有十分重要的意义。据报道,中药百部、黄芪、啤酒花在中医药治疗肺结核过程中有较好的疗效,但其具体的药用成分及其抗结核杆菌的作用尚不明确。本实验通过常规方法提取这三种中药的化学成分,将其分别作用于THP-1细胞吞噬结核杆菌模型,观察这三种成分在THP-1细胞吞噬结核杆菌过程中所发挥的作用以及这三种成分对THP-1细胞活力的影响,为抗结核中药的筛选及其作用机制的研究提供实验依据。方法:本研究利用常规方法从中药百部、黄芪、啤酒花中提取得到百部碱、黄芪甲苷和啤酒花黄酮三种化学成分;并用SephadexLH-20凝胶柱色谱法对总百部碱进行分离,得到生物碱成分;利用雷氏盐比色法、标准曲线法测得单体百部碱含量;比色法测得黄芪甲苷、啤酒花黄酮的含量;通过沉淀反应、颜色反应、薄层色谱法对这三种中药成分进行鉴定。应用THP-1细胞模型,通过形态学观察百部碱、黄芪甲苷、啤酒花黄酮对THP-1细胞的作用;利用THP-1细胞模型,观察这三种成分对吞噬过程的影响;利用MTT法验证黄芪甲苷和啤酒花黄酮对THP-1细胞活性的增强作用,应用NO试剂盒法检测了啤酒花黄酮对THP-1细胞吞噬结核杆菌过程中NO量的变化。结果:利用乙醇回流法和超声波法成功提取百部碱、黄芪甲苷和啤酒花黄酮化学成分;雷氏盐比色法测定百部总生物碱含量为0.1mg/mL;黄芪甲苷的含量为0.7mg/mL;啤酒花黄酮的含量为0.1mg/mL,且在啤酒花黄酮的提取过程中比较了超声波提取法与乙醇回流法的提取率,超声波提取法的提取率高于乙醇回流法的提取率。在应用THP-1细胞模型过程中,成功观察到三种药物对细胞的作用以及THP-1细胞吞噬结核杆菌的过程;MTT法验证了黄芪皂苷与啤酒花黄酮对THP-1细胞活性的增强作用,且随着药物浓度的升高呈现显著增强趋势。利用NO试剂盒检测啤酒花黄酮对THP-1细胞吞噬结核杆菌过程中NO含量变化显示,啤酒花黄酮可增加吞噬过程中NO的释放。结论:黄芪甲苷、啤酒花黄酮对于THP-1细胞活性具有增强作用;啤酒花黄酮可促进THP-1细胞吞噬结核杆菌过程中NO的释放;百部碱可促进THP-1细胞对结核杆菌的吞噬。这三种中药成分有望在未来结核病的治疗过程中发挥作用。
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