siRNA沉默SLC7A5基因对SKM-1细胞系生物学特性的影响

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研究背景:本课题组采用巢式病例对照研究,使用前瞻性方法收集连续性样本,首次建立了我国435例成人原发骨髓增生异常综合征(MDS)患者的研究队列,截至2008年12月30日随访终点,该队列全部患者中,有383例(88%)得到随访,52例(12%)失访,中位随访时间20.3(4.2—57.1)月。其中有41例患者转化为急性白血病(病例组),342例患者未转化为急性白血病(对照组)。通过病例组患者初诊时和转白后的骨髓单个核细胞全基因组表达谱芯片的检测分析(自身对照研究),以及病例组和对照组患者初诊时的骨髓单个核细胞全基因组表达谱芯片的检测分析(组间对照研究),筛选出由6条差异基因组成的子集,可以将病例组和对照组明显、稳健地区分开。这6条基因按差异显著程度依次为TUBB、PSMD1、SLC7A5、ATG3、TUBB2C和TIMM10。目前本课题组其他成员已完成对TUBBvPSMD1和ATG3基因的研究。目的:研究SKM-1细胞系中SLC7A5基因转录和表达的特点,观察SLC7A5基因沉默对SKM-1细胞系增殖、凋亡的影响,探讨SLC7A5基因表达异常在MDS转白中的作用。方法:应用阳离子脂质体转染方法,在SKM-1细胞系中转染化学合成法制备的SLC7A5特异性siRNA。转染24小时后开始收集细胞,测定转染效率。使用Realtime PCR的方法分别检测转染组和对照组细胞中SLC7A5基因的表达水平。观察和比较SLC7A5基因沉默前后SKM-1细胞系的生长曲线、细胞周期、细胞凋亡以及细胞超微结构的变化。结果:通过转染SLC7A5特异性siRNA沉默SLC7A5基因后的SKM-1细胞系与对照组比较,实验组SKM-1细胞系的增殖能力受到抑制,G0/G1期细胞比例升高、S期细胞比例降低、提示细胞周期被阻滞在G0/G1期。实验组SKM-1细胞系的早期凋亡和晚期凋亡细胞比例均增加,提示SLC7A5-siRNA沉默SKM-1细胞系的SLC7A5基因后,有诱导细胞凋亡作用。实验组SKM-1细胞系电镜超微结构观察可见凋亡小体增多。结论:SLC7A5基因通过编码L型氨基酸转运蛋白1(LAT1)对信号通路的调节,在肿瘤细胞的增殖、分化中起到重要作用。通过siRNA技术沉默该基因在MDS转白细胞系SKM-1的表达,可使细胞增殖受抑,凋亡增加。提示SLC7A5基因表达上调有促进MDS向急性白血病转化的疾病发展进程。SLC7A5基因作为MDS转白的潜在关键基因,具有进一步深入研究的价值。
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