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目的:观察在体外细胞培养环境中,雌激素对人成骨肉瘤细胞株细胞(MG-63)增殖活性的影响,以及合成分泌骨保护素蛋白(OPG)和OPGm RNA变化的情况,并进一步探讨:(1)雌激素作用于MG-63细胞后,转录因子作用OPG基因启动子的序列范围;(2)雌激素作用于MG-63细胞后,mi R-145表达变化,同时探究雌激素是否通过mi R-145靶向调节OPG的表达。方法:(1)以MG-63细胞为研究对象,采用MTT法检测细胞在不同浓度17β-雌二醇(E2)(0n M、1n M、10n M、100n M)作用下1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天不同时间点细胞增殖活性的变化,利用Western Blot蛋白分析法和ELISA定量分析法检测MG-63细胞在不同浓度雌激素作用48h后OPG蛋白表达的变化情况,并利用Realtime-PCR技术分析OPG编码基因在m RNA水平的变化;(2)以人基因组DNA为模板,扩增不同序列长度的的OPG启动子序列(OPG结构基因上游分别为:986bp/769bp/527bp/255bp),分别将其插入p GL3-basic质粒的启动子区域,然后分别将p GL3-basic-986/769/527/255-OPG载体质粒,转染入MG-63细胞中,利用双荧光素酶报告基因,检测在不同浓度(0n M、1n M、10n M、100n M)雌激素E2作用下,细胞中不同长度骨保护素启动子序列对荧光素酶的表达的影响,以探究雌激素作用于MG-63细胞后,转录因子作用于OPG基因启动子的最佳序列范围;(3)观察在体外细胞培养环境中,不同浓度(0n M、1n M、10n M、100n M)雌激素E2作用于MG-63细胞后,mi R-145的变化情况;将mi R-145的相似物mimics-145导入细胞内,或导入反义寡核苷酸片段ASO-145,增加或抑制mi R-145表达,观察骨的保护素蛋白和OPGm RNA变化情况;(4)利用双荧光素酶技术检验OPG基因是否为mi R-145的靶向基因。结果:(1)利用MTT法发现雌激素E2对MG-63细胞生物活性具有促进作用。随着雌激素浓度的增加及作用时间的延长,MG-63细胞活性明显增强,但是10n M与100n M的浓度的雌激素可提高细胞的增殖活性率,两者之间并无明显差别(P>0.05);(2)雌激素E2与细胞共培养48h后,Western Blot蛋白分析和ELISA法显示细胞合成分泌表达OPG蛋白的能力显著增强,尤其在雌激素浓度为10n M时,OPG蛋白表达量最高。通过Realtime-PCR技术分析发现,雌激素E2作用MG-63细胞48h后,细胞OPGm RNA的转录水平明显提高,特别在浓度为10n M时,OPGm RNA的转录水平最高,其结果与雌激素处理MG-63细胞后Western Blot、ELIS A分析OPG蛋白含量变化相似;(3)利用双荧光素酶报告基因,检测在不同浓度雌激素E2作用下,细胞中p GL3-basic-986载体质粒骨保护素启动子的表达情况,发现当雌激素浓度为10n M时,荧光强度最高。(4)含有荧光素的p GL3-basic-986/769/527/255-OPG载体质粒的MG-63细胞在E2浓度为10n M培养条件下,结果显示:在p GL-basci-986质粒与p GL-basci-769质粒组中,雌激素E2刺激组荧光强度明显高于未受雌激素刺激的对照组,两者之间统计学差异明显(P<0.05),在p GL-basci-527质粒和p GL-basci-255质粒组中,雌激素E2刺激组与对照组之间,差异不明显,无统计学意义(P>0.05)。p GL-basci-986质粒与p GL-basci-769质粒组荧光强度明显高于p GL-basci-527质粒和p GL-basci-255质粒组,具有统计学差异(P<0.05),但p GL-basci-986质粒与p GL-basci-769质粒组之间,差异无统计学意义(P>0.05),荧光强度p GL-basci-255质粒组略低于p GL-basci-527质粒组,但两者之间差异无统计学意义(P>0.05);(5)雌激素E2作用于MG-63细胞后,mi R-145表达下调;(6)在MG-63细胞内导入mi R-145的相似物mimics-145,上调mi R-145表达,OPG蛋白和转录OPGm RNA表达下降;当导入反义寡核苷酸片段ASO-145,下调mi R-145表达,OPG蛋白及OPGm RNA表达上升;(7)双荧光素酶技术检测提示OPG基因为mi R-145的靶向基因。结论:(1)雌激素能够增强人成骨肉瘤细胞(MG-63)的活性,促进骨保护素蛋白基因的转录过程,增加骨保护素蛋白的合成表达;(2)雌激素作用于MG-63细胞后,转录因子作用于OPG基因启动子的序列范围在其上游527-769bp内,具体结合的启动序列还需进一步地深入研究;(3)雌激素E2作用于MG-63细胞,通过调控mi R-145的表达,靶向调节OPGm RNA的表达,进而影响骨保护素蛋白的表达。