硝唑沙奈(Nitazoxanide，NTZ)是一种四氢噻唑类化合物，又名硝唑尼特，具有广谱抗寄生虫和抗微生物活性，对寄生虫、细菌以及病毒有效。NTZ的药效已经被大量试验证明，很多国家已经应用该药并且取得了较好的疗效，通过动物试验和体外活性试验可以看出，NTZ应用于兽医临床治疗畜禽寄生虫病、敏感菌引起的腹泻和猪轮状病毒腹泻也可能取得良好的效果。在目前人兽共患疫病流行、微生物耐药性泛滥的情况下，NTZ作为一种新药将在治疗动物和人相应疾病方面起到重要作用。在我国，对NTZ在动物上临床应用的系统研究甚少，特别关于其在食品动物上的药理、毒理、代谢、应用剂量和组织残留等问题几乎没有研究报道。为了阐明NTZ在我国主要的食品动物猪和鸡体内的代谢特点和排泄规律，本文建立了NTZ原形及其主要代谢物在猪、鸡、大鼠的血浆和排泄物中的LC-LTQ-Orbitrap-MS和HPLC-UV检测方法，并用该方法开展了NTZ在猪、鸡和大鼠体内的代谢和排泄规律的比较研究。　　1硝唑沙奈在猪体内的代谢研究　　建立了一种用于分离和鉴定NTZ在生物基质中的LC-LTQ-Orbitrap-MS方法，采用了负离子模式，用不同的处理方法确定各种可能代谢物的存在，再结合母药的元素组成及其结构，能够快速、准确确定每个代谢物及其碎片离子的元素组成并鉴定其结构。猪按200mg/kg的剂量内服NTZ后，前腔静脉采血，血浆样本用乙腈沉淀蛋白后，采用建立的LC-LTQ-Orbitrap-MS方法对猪血浆中NTZ的代谢物进行了分离和鉴定。用MassFrontierTM6.0分子预测软件预测NTZ可能的碎裂方式及可能的碎片离子质量数，采用NetWorks代谢物鉴定软件对质谱数据进行处理，Xcalibur2.0.7软件分析线性离子阱质谱仪测得的质谱图。根据分子量以及多级质谱的离子碎片数据，结合体内代谢反应规律，对其代谢物进行了结构确定。最终在猪血浆中发现并鉴定了7种代谢物，分别是替唑尼特(tizoxanide，T)、葡糖苷酸替唑尼特(tizoxanideglucuronide，TG)、硫酸替唑尼特(tizoxanidesulfate，TS)、单羟基替唑尼特(hydroxytizoxanide，HT)、葡萄糖替唑尼特(tizoxanideglucose，TGS)、氨硝基噻唑(aminonitrothiazole，ANT)、硫酸单羟基替唑尼特(hydroxytizoxanidesulfate，HTS)。其中TGS和HTS是首次发现的NTZ在动物体内的代谢物。在此基础上首次提出了NTZ在猪体内的可能的代谢方式和代谢途径，其中。NTZ的脱乙酰基化和T的葡糖苷酸结合是猪内服给药后NTZ在体内的主要代谢方式。　　2硝唑沙奈在鸡体内的代谢研究　　利用建立的LC-LTQ-Orbitrap-MS方法首次对鸡血浆中NTZ的代谢物进行了分离和鉴定。鸡按200mg/kg的剂量内服NTZ后，从鸡的单侧翅下静脉采集血样，血浆样本用乙腈沉淀蛋白后，采用猪血浆相同的分析鉴定策略，在给药后的鸡血浆中发现并鉴定了5种代谢物(T、TG、TS、HT、ANT)。在此基础上首次提出了NTZ在鸡体内的可能的代谢方式和代谢途径，其中NTZ的脱乙酰基化和T的硫酸结合是鸡内服给药后NTZ在体内的主要代谢方式。　　3硝唑沙奈在大鼠体内代谢研究　　利用建立的LC-LTQ-Orbitrap-MS方法对大鼠血浆中NTZ的代谢物进行了分离和鉴定。大鼠按200mg/kg的剂量内服NTZ后，从大鼠的框下静脉丛采集血样，血浆样本用乙腈沉淀蛋白后，采用猪血浆相同的分析鉴定策略，在给药后的大鼠血浆中发现并鉴定了7种代谢物。其中除仅在雌性大鼠血浆中检出TGS外，其它代谢物和猪血浆中的代谢物一样，并且没有性别差异。在此基础上提出了NTZ在大鼠体内的可能的代谢方式和代谢途径，其中NTZ的脱乙酰基化和T的葡糖苷酸结合是大鼠血浆中的主要代谢方式。　　4硝唑沙奈在猪、鸡和大鼠排泄物中的代谢谱系　　利用建立的LC-LTQ-Orbitrap-MS方法对猪、鸡和大鼠的排泄物中NTZ的代谢物进行了分离和鉴定。NTZ按200mg/kg的剂量内服给药后，在猪、鸡和大鼠的粪便中均检出原形药物NTZ。在猪尿液中检出5种代谢物(T、TG、TS、ANT和HT)，在猪粪便中检出2种代谢物(T和ANT)，而在鸡粪便中检出4种代谢物(T、TS、ANT、和HT)，在雌性大鼠的尿液中检出3种代谢物(T、TG和ANT)，在雄性大鼠的尿液中检出5种代谢物(T、TG、TS、ANT和HT)，在大鼠粪便中检出2种代谢物(T和ANT)。在此基础上首次提出了NTZ在猪、鸡和大鼠排泄物中的代谢谱系，结果显示，对于哺乳动物的尿液中的代谢谱系没有差异，但对于粪便中的代谢谱系来说，禽类和哺乳动物之间存在显著的种属差异。　　5硝唑沙奈在猪、鸡体内的排泄规律　　优化建立了一种用于动物排泄物中NTZ原形药物及代谢物的敏感、特异的HPLC-UV定量检测方法。尿液或粪便样品经乙腈提取后，用OASIS()HLBSPE柱净化，选用Gemini5uC18(250mm×4.60mm，5μm)反相色谱柱，在乙腈-0.01mol/LKH2PO4(65:35，V/V)流动相系统分离和测定，流速为1.0mL/min，紫外检测波长为360nm。并且比较研究了NTZ按200mg/kg的剂量内服给药后，NTZ及其代谢物在猪和鸡的排泄规律。8头健康杜长大三元杂交猪，按200mg/kg单次剂量内服NTZ后，猪的排泄物中以可测定的代谢物形式排出体外占内服NTZ总量的15.86％，其中通过尿液排泄(13.53％)的比例远远大于粪便(2.33％)。排泄物中总的可检出的排泄物以TG最高，相当于内服量的13.02％以TG的形式通过尿液排出体外，其次是原形药物NTZ和脱乙酰基化代谢物T。90％以上TG是在给药后24h以内排出，所有可检出代谢物在给药后96h基本排泄完毕，累积排泄达99.83％。10只健康科宝白羽肉鸡，按200mg/kg单次剂量内服NTZ后，鸡的粪便中以可测定的代谢物形式排出体外的量相当于给鸡内服NTZ总量的37.38％。其中以脱乙酰基化代谢物T的形式最高，相当于内服NTZ量的27.13％，以原形药物排出的比例也较高，约占内服NTZ量的10％。98％以上的代谢物在给药后48h以内排出，给药后72h基本排泄完毕，累积排泄达99.93％。