【摘 要】
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为研究7,8-二羟基黄酮（7,8-Dihydroxyflavone,7,8-DHF）对抗6-羟基多巴胺（6-Hydroxydopamine,6-OHDA）毒性作用的分子机制,本研究应用6-OHDA诱导PC12细胞损伤,采用MTT法,观察7,8-DHF对PC12细胞的保护作用并用酪氨酸激酶（tyrosine kinase B, TrKB）受体阻断剂ANA-12、K252a和磷脂酰肌醇3位羟基激酶（p
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为研究7,8-二羟基黄酮（7,8-Dihydroxyflavone,7,8-DHF）对抗6-羟基多巴胺（6-Hydroxydopamine,6-OHDA）毒性作用的分子机制,本研究应用6-OHDA诱导PC12细胞损伤,采用MTT法,观察7,8-DHF对PC12细胞的保护作用并用酪氨酸激酶（tyrosine kinase B, TrKB）受体阻断剂ANA-12、K252a和磷脂酰肌醇3位羟基激酶（phosphatidylinositol-3 kinase, PI3K）抑制剂LY294002对PC12细胞保护作用的阻断效应。并采用Hoechst 33258染色、flow cytometry、RT-PCR、酶标法等多种实验方法,观察PC12细胞的凋亡,TrKB受体的表达和7,8-DHF的自身抗氧化性等来探讨7,8-DHF对PC12细胞的保护作用机制。实验结果如下：16-OHDA可剂量依赖式降低PC12细胞的存活率（P<0.001）；7,8-DHF可减弱6-OHDA对PC12细胞的毒性作用（P<0.001）,并且7,8-DHF在25μM浓度时保护作用最明显。2 7,8-DHF对抗6-OHDA的毒性作用可以被PI3K抑制剂LY294002阻断（P<0.001）。36-OHDA可明显导致PC12细胞的凋亡（P<0.001）,而7,8-DHF可明显降低PC12细胞的凋亡率（P<0.001）46-OHDA可明显降低PC12细胞的线粒体膜电位（P<0.01）,而7,8-DHF可明显逆转上述改变（P<0.01）56-OHDA可以明显升高细胞脂质过氧化物丙二醛（MDA）含量（p<0.05）,而7,8-DHF预保护可以抑制6-OHDA诱导的MDA升高（P<0.05）。6 7,8-DHF可以明显增加超氧化物歧化酶（SOD）的活性（p<0.01）,而经6-OHDA处理的细胞SOD没有明显变化（p>0.05）以上结果表明7,8-DHF可明显对抗6-OHDA对PC12细胞的损伤,其机制可能与7,8-DHF抑制细胞凋亡,激活PI3K/Akt信号通路以及其自身的抗氧化性有关。本研究不仅为7,8-DHF的神经保护作用机制提供了进一步的实验依据,而且为进一步开发为可用于临床防治帕金森病的新药提供实验依据。
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