变形假单胞菌是自然环境中的常见菌,是水产养殖中较为常见的致病菌。在养殖期间,变形假单胞菌引起的疾病几乎伴随了鱼类生长的所有阶段,该病发病速度快,发病时间周期较大。ABC转运蛋白是一个成员众多的膜蛋白超家族。从细菌到人类,它们通过细胞膜的渗透性屏障运输分子。运输的分子类型极其多样化,从离子、小到中型分子(糖、氨基酸、脂质、离子金属)到大的化合物(多肽、蛋白质、有机金属复合物和抗生素)均包含在内。它们参与了许多重要的生理过程,如营养导入、细胞解毒、脂质稳态、信号转导、抗病毒防御和抗原表达。本文通过将变形假单胞菌中的一个ABC转运蛋白基因进行稳定沉默,然后经过一系列的后续实验深入探索该基因在变形假单胞菌侵染斜带石斑鱼过程中的功能。首先针对ABC转运蛋白基因的五个不同靶点构建沉默株,用实时荧光定量PCR检测沉默效率,挑选沉默效率最好的菌株经活体感染实验检验发现沉默株的死亡率降低,由此得知该基因在变形假单胞菌的致病性中确实起作用。对沉默株与野生株侵染斜带石斑鱼后的各个组织跟踪观察发现,在病症最明显的脾脏组织中,沉默株的病症明显减弱,再次证明ABC转运蛋白基因在变形假单胞菌的致病性中有明显作用。通过生长曲线的测定发现,沉默株与野生株在实验室体外培养条件下的生长速度虽略有差异,但差异并不显著,且总体趋势相同,可以认为ABC转运蛋白基因的沉默对变形假单胞菌的生长没有造成明显影响。通过时空性表达研究发现,变形假单胞菌在侵染斜带石斑鱼的过程中,细菌从36 h开始大量增殖,在48 h时达到顶峰。本文选取变形假单胞菌感染斜带石斑鱼48 h时的脾脏进行转录组测序,对得到的大量转录组数据分析发现,病原菌的大量差异基因集中在新陈代谢的过程中,证明ABC转运蛋白基因在变形假单胞菌中确实起到转运各种物质的功能;而对宿主而言,大量差异基因集中在信号转导和免疫系统过程中,证明病原菌侵染宿主后,宿主产生强烈的免疫应答效应。通过这种方式我们对变形假单胞菌在宿主体内的表达情况进行研究,为解释其致病机制提供参考依据。