鸭病毒性肝炎(duck viral hepatitis，DVH)是由鸭病毒性肝炎病毒(duck hepatitis virus，DHV)引起的一种可导致雏鸭产生严重肝炎的疾病，发病率和死亡率高，造成严重的经济损失。近年来，广西等一些地区流行一种应用传统Ⅰ型DHV疫苗预防和控制效果不好的临床雏鸭肝炎。本研究旨在对临床流行的DVH病例进行病毒分离与血清型鉴定，并建立一种快速诊断的RT-PCR方法，为DVH的有效防控提供有效的依据及支持。应用鸡胚尿囊腔接种的方法，成功地从31份DVH的可疑病料中分离到16株病毒，用制备的Ⅰ型DHV血清在鸡胚上进行中和试验。结果有编号为050028、NN4、HP、050058、050044、ZHJB、NN3共7株分离物被中和，而毒株ZHJA完全不被中和，毒株040146被部分中和；用制备的免抗ZHJA高免血清完全不能中和SHDE5病毒，能部分中和040146株。结果表明050028、NN4、HP、050058、050044、ZHJB、NN3属于Ⅰ型DHV；ZHJA株属于新型DHV；040146属于Ⅰ型变异株(Iv)。另外7株编号为050047、050050、050061、050084、NN1、NN2、YY1毒株由于毒价较低，未能进行中和试验而暂未定型。根据发表的DHV序列，针对病毒的VP0基因设计一对引物，建立的RT-PCR方法能对参考毒株和16株分离株扩增到426bp的目的片段，对临床的25份病料进行检测，阳性率为48％(12／25)，其他阴性参考株的扩增则均为阴性。在此基础上，建立了一个半巢式PCR，对参考株和16株分离株均能扩增到293bp的目的片段，对临床25份病料的阳性检出率为84％(21／25)。结果表明建立的DHV的RT-PCR诊断技术具有特异、快捷、敏感的特点。半巢式PCR则显著提高了阳性检出率，为DHV临床快速诊断提供了一种敏感而可靠的新技术。对分离株的部分VP0和3D基因序列分别进行测定，并与已发表的序列进行比较。结果，分离株之间VP0基因的核苷酸同源性在90.3％～99.5％之间，其中HP株与已发表的Ⅰ型疫苗株之间的同源性最高，达99.7％，新型DHVZHJA与其他发表的参考株序列的同源性最低，为91.1％，其它分离株界于二者之间；遗传进化树上，HP株与中国大陆疫苗株C80在同一分支上，ZHJA株则单独在另外一个分支上，与中和试验的结果相吻合；在3D基因的序列上，参考株SHDE5与Ⅰ型参考毒株E53在同一分支上，其他分离株都单独在较远的分支上，显示与中和试验的结果没有相关性。研究结果表明，目前流行的DHV毒株主要为Ⅰ型，兼有Iv型和新型的流行；中和试验是一种可靠的鉴定和分型的方法；建立的RT-PCR方法能直接从病料检测到病毒，具有快速、敏感、特异的优点；序列测定结果表明，病毒的VP0基因可能与血清型有一定的关系，而未发现3D基因与病毒的血清型有相关。