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目的在全球,肺癌是造成癌症相关疾病死亡的主要原因。目前铂类为基础的两药化疗方案成为晚期NSCLC的一线治疗方案。顺铂(DDP)、卡铂(CBP)的毒副作用和继发性耐药限制了其临床应用。洛铂(LBP)为新型的三代铂类抗癌药物,在各种肿瘤中展示了良好的抗癌活性。我们拟探讨LBP诱导p53野生型的NSCLC细胞株A549细胞凋亡的机制。方法采用 CCK-8 法检测 LBP 对 SK-MES-1(p53 突变型),NCI-H1299(p53 缺失型)和A549(p53野生型)细胞的增殖抑制作用;采用shRNA技术沉默A549细胞的p53基因;DCFDA染色结合荧光显微镜和流式细胞仪(FCM)检测洛铂作用于 A549、A549/NS-shRNA 和 A549/p53-shRNA 细胞内 ROS 的变化;Annexin V-PI染色后采用FCM检测LBP诱导的A549细胞、A549/NS-shRNA和A549/p53-shRNA细胞凋亡;FCM检测低浓度的LBP对A549细胞周期的影响;Western Blot 法检测 p53、Bax、Bcl-2、clv-PARP、clv-caspase3、caspase8、caspase9和p-p38MAPK等蛋白水平的变化;应用抗氧化剂NAC和p38MAPK抑制剂SB203580检测对LBP诱导的A549细胞凋亡以及细胞内p53、ROS及p-p38MAPK蛋白的表达的影响;建立裸小鼠荷瘤模型,用于评价LBP对A549荷瘤鼠荷瘤的抗肿瘤作用;TUNEL法检测荷瘤组织细胞的凋亡。结果1.LBP对p53突变型SK-MES-1细胞的24h,48h和72h的IC50值分别为63.47±1.03μM,15.77±1.09μM 和 12.0±1.08μM。LBP 对 p53 缺失型 H1299 细胞的 24h,48h 和 72h 的 IC50 值分别为 67.26±1.06μM,17.98±1.05μM 和 7.85±1.01μM。LBP对p53野生型A549细胞的24h,48h和72h的IC50值分别为11.69±1.05μM,5.02±1.11μM 和 2.43±1.01μM;6μM,12μM 的 LBP 作用于 A549 细胞 24h 后,G1期细胞的比例分别为72.03%±1.53%和73.78%±1.26%,而对照组G1期只占47.47%±1.59%,LBP能诱导A549细胞发生G1期细胞周期阻滞;当12μM和24μM的LBP作用于A549 24h后,凋亡细胞的比率分别为20.2%±1.3%和44.5%±1.6%;当上述浓度的LBP作用于A549 48h后,凋亡细胞的比率分别为55.3%±1.2%和 70.0%±0.9%;12μM 和 24μM 的 LBP 作用于 A549 24h 后,随着浓度的升高同样视野范围内可见细胞核的数量逐渐减少;在12μM的LBP作用24h时,可见部分细胞核固缩,变形。在24μM的LBP作用于24h时,可见凋亡小体;24μM的LBP作用于A549细胞4h后,细胞内ROS明显升高;LBP可诱导A549细胞PARP、Bax、Clv-caspase3,8,9上调和Bcl-2的表达下调,呈浓度依赖性;LBP能抑制A549荷瘤鼠荷瘤的生长和促进肿瘤组织细胞凋亡。2.LBP 对 A549/p53-shRNA 细胞的 24h、48h 和 72h 的 IC50 值分别为39.54±1.02μM,27.89±1.13μM 和 10.93±1.08μM,LBP 可抑制 A549/p53-shRNA 和A549/NS-shRNA细胞的增殖,且呈时间、浓度依赖性;LBP对A549/NS-shRNA细胞的 24h、48h 和 72h 的 IC50 值分别为 11.48±1.12μM,5.14±0.94μM 和2.49±0.90μM。当24μM的LBP作用于A549/NS-shRNA 24h后,凋亡细胞的比率为45.0%±1.1%;当上述浓度的LBP作用于A549/p53-shRNA24h后,细胞未见明显凋亡,可见A549/NS-shRNA对LBP诱导的凋亡更敏感;LBP可诱导A549/NS-shRNA细胞内ROS的上调,而相同浓度的LBP作用于A549/p53-shRNA细胞,细胞内ROS轻度上调;LBP能诱导A549/NS-shRNA的p53和p-p38MAPK的上调;A549/p53-shRNA的基础p-p38MAPK上调,LBP未能诱导其表达上调。NAC及SB203580能阻断LBP诱导的A549细胞的促凋亡作用。NAC能阻断LBP诱导的A549细胞的ROS上调但SB203580未能阻断LBP诱导的ROS上调。NAC及SB203580不能阻断LBP诱导的A549细胞的p53的上调。结论1.LBP对p53野生型的A549更加敏感。低浓度LBP能诱导A549细胞发生G1期细胞阻滞。LBP能诱导A549细胞凋亡;LBP能诱导RARP、Bax、clv-caspase3、clv-caspase8、clv-caspase9 的表达上调和 Bcl-2 表达下调,表明内、外源性凋亡通路都参与了 LBP诱导的细胞凋亡。2.LBP可通过诱导肿瘤组织细胞凋亡来抑制A549荷瘤鼠荷瘤的生长。3.首次发现p53/ROS/p38MAPK通路参与了 p53野生型A549细胞的凋亡。4.LBP是一种有潜力作为治疗p53野生型的NSCLC的铂类药物。