论文部分内容阅读
目的：构建次级淋巴组织趋化因子[SLC]的真核表达载体pcDNA3.1(-)-SLC，表达制备SLC，进而研究该质粒在小鼠抗宫颈癌免疫中的作用。
方法：限制性内切酶EcoRI,BamHI 将SLC 片段从pSG5-SLC 上酶切下来，用连接酶将其重组到pcDNA3.1(-)，构建了pcDNA3.1(-)-SLC 真核表达载体。在体外用电穿孔的方法将pcDNA3.1(-)-SLC 转入到人宫颈癌细胞Hela 中，培养、分泌表达SLC于培养液中，用westernblot 鉴定。向BALB/C 小鼠右侧腋下瘤体中多次分别注入不同浓度的重组SLC 质粒，通过流式细胞仪检测小鼠血液、脾脏中的免疫细胞比例,研究趋化因子在肿瘤免疫中起到的全身效应，通过肿瘤生长比较，研究趋化因子SLC的局部效应。
结果：将构建好的pcDNA3.1(-)-SLC 用EcoRI,BamHI 双酶切后电泳，可观察到约400bp 及5300bp 两条带，其中约400bp 为SLC 基因片段，约5300bp 为pcDNA3.1(-)空载体。表明pcDNA3.1(-)-SLC 真核表达载体构建成功。经电穿孔转染表达后，westernblot 可见特异性结合条带，与理论预期值相符，证明其可以在体外表达；将质粒注入肿瘤瘤体，可观察到以下现象：与生理盐水对照组相比，小鼠血液与脾脏淋巴细胞比例明显降低，小鼠肿瘤生长明显受抑，而且注射SLC 的量越大，抑瘤效果越明显。
结论：成功构建了SLC 真核表达载体，在宫颈癌细胞Hela 中以分泌形式表达。SLC裸基因治疗促进机体的抗肿瘤免疫应答。