广西莪术指纹图谱及有效成分含量测定

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目的:建立广西莪术HPLC指纹图谱的共有模式,补充和提高广西莪术质量控制技术,减少批次间差异,保证广西莪术的安全性和有效性。建立广西莪术有效成分的HPLC质量控制方法,为科学评价和有效控制广西莪术的质量以及建立广西莪术规范化生产基地提供实验依据。测定不同产地广西莪术挥发油的含量并对其进行 GC-MS分析,为建立广西莪术GC-MS指纹图谱奠定基础。  方法:(1)采用高效液相色谱法建立广西莪术HPLC指纹图谱。  供试品制备条件为:取广西莪术药材约3g,精密称定,加甲醇30mL,超声提取30min,补足减轻损失,取续滤液,过0.45μm微孔滤膜,得供试品溶液。色谱柱:岛津(Shim-pack VP-ODS)C18柱(5μm,4.6mm×250mm);流动相:乙腈-水梯度洗脱;检测波长:214nm;柱温:30℃;流速:1mL/min;进样量:10μL  以保留时间与吉马酮一致的色谱峰为参照峰,对实验室制备的16批广西莪术药材饮片进行了指纹图谱的分析。采用“指纹图谱相似度计算软件”,建立广西莪术指纹图谱共有模式。  (2)采用上述色谱条件测定实验室制备的16批广西莪术药材饮片中吉马酮和呋喃二烯的含量,为建立广西莪术的规范化生产基地提供实验依据。  (3)采用水蒸气蒸馏法测定实验室制备的15批广西莪术药材饮片中有效成分挥发油的含量,并用GC-MS对其中13个批次的挥发油进行分析比较。  气相色谱条件:  程序升温:起始温度70℃,保持2min;以5℃/min升至145℃,保持20min;最后以20℃/min升至280℃,保持2min。载气:高纯氦气;载气流速1mL/min;进样口温度:250℃;进样量1uL,不分流。  质谱条件:EI电离方式;离子流温度280℃;四级杆温度:150℃;倍增电压:1247V;发射电流:34.6μA;质量范围50-550Amu;扫描速度:0.34s;电离能量70eV。  结果:(1)HPLC指纹图谱标定了17个共有特征峰,16个批次的广西莪术中,除南宁仙湖和广西药用植物园的广西莪术外,其余14个广西莪术主产地钦州的广西莪术相似度为均大于0.9。  (2)不同产地的广西莪术,吉马酮和呋喃二烯含量变化较大。不同产地广西莪术吉马酮含量均在1.4877mg/g~0.4365mg/g范围内。不同产地广西莪术呋喃二烯含量均在4.0766mg/g~0.2676mg/g之间。  (3)13批广西莪术挥发油得油率在0.7%~2.0%之间,相关系数中位数大都低于0.9。  结论:所建立的HPLC指纹图谱及含量测定方法灵敏度高,专属性强,能准确快速的进行测定。HPLC指纹图谱以保留时间与吉马酮一致的色谱峰为参照峰,建立了广西16个广西莪术主产地钦州的广西莪术的指纹图谱,标定了17个共有峰。HPLC含量测定以广西莪术中吉马酮和呋喃二烯的含量作为指标,测定了广西不同产地莪术的指标成分的含量。为广西莪术的真伪鉴别及质量评价提供依据。13个产地的广西莪术由于挥发油成分相差较大,无法建立GC-MS指纹图谱。可能与广西莪术饮片的处理工艺以及挥发油GC-MS样品制备有关。
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