水产养殖过程中抗生素药物的高剂量及多种药物混合使用等滥用现象,往往使水产病原菌在高的选择压力下产生更强的耐药性,多重药物抗性细菌也时有发生,大大增加了微生物病害防治的难度,给水产养殖业带来严重危害。为探讨抗性细菌的抗药性分子遗传机理,从而为控制抗药性细菌的产生和传播提供研究基础,本研究以由大连刺参、中球海胆、皱纹盘鲍与大菱鲆这四种水体所分离的多抗性细菌筛选为基础,利用分子生物学方法对这些抗性细菌进行了土霉素、氯霉素及氟氯霉素抗性基因的筛选。通过对分离自这四个养殖水体中的抗性细菌16S rRNA基因序列分析和系统进化树的构建,这些抗性细菌大部分属于海洋弧菌(Vibrio) ,少数几株为假交替单胞菌(Pseudoalteromonas)或交替单胞菌(Alteromonas)。弧菌类菌株中大部分为塔斯马尼亚弧菌(Vibrio tasmaniensis)或灿烂弧菌(Vibrio splendidus)。我们采用多重PCR方法分析这些抗性细菌中四环素抗性基因(tet基因)、氯霉素抗性基因(cat基因)与氟氯霉素(flo基因)的分布特征。在对80株抗性细菌tet基因的分析中,共有tet(A)、tet(B)、tet(D)、tet(E)、tet(M)五种基因单倍型被检测到,其中tet(B)、tet(D)、tet(M)三种基因的携带率最高,分别为33.8%、42.5%、41.3%。对80株抗性细菌cat与flo基因的分析中,共有cat II与cat IV两种cat基因基因单倍型被检测到,它们的检出率分别为37.5%、18.8%;共36株菌株携带floR基因,检出率为45.0%。研究发现,大部分耐药细菌都携带多种抗性基因,证明它们的耐药性主要是由相应抗性基因决定的。