DSCR1多克隆抗体的制备与人和小鼠内源DSCR1蛋白的表达检测分析

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本实验室利用化学合成的方法合成人DSCR1氨基端177-192AA多肽,经纯化后偶联到匙孔槭血蓝蛋白(KLH)上,作为抗原免疫新西兰兔,得到高效特异的DSCR1兔多克隆抗体。接着,通过利用这个抗体对小鼠脑、心、肾组织和MCF-7、HT1080、Hela细胞进行Westernblot检测以及对小鼠脑组织进行IP实验,从蛋白质水平上获知DSCR1各蛋白剪接型在这些小鼠组织中表达情况,并确证了此多抗的实验应用范围。   此外,通过蛋白酶体抑制剂MG132处理Hela细胞的试验,发现DSCR1蛋白在体内可能存在泛素修饰,参与"泛素-蛋白酶体"途径。为进一步证明这一假设,本研究又利用这个DSCR1兔多克隆抗体以及泛素多克隆抗体对小鼠脑组织进行免疫共沉淀检测。实验证实小鼠脑组织中的DSCR1蛋白可能具有泛素修饰,这一结果从原位角度证明上述假设。   
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