黔产山蜡梅药效物质研究

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目的:利用现代的分离提取技术对黔产山蜡梅(Chimonanthus nitens Oliv.)根主要化学成分进行进行提取、分离和结构,比较山蜡梅根阴干、烘干、蒸制、炒炭不同处理后的毒性变化,以及东莨菪苷、秦皮苷、东莨菪内酯、异嗪皮啶4种成分含量变化,探索其药效物质基础,为有效利用山蜡梅提供理论依据。方法:1.将山蜡梅根干燥、粉碎后采用75%乙醇回流提取。运用正相硅胶、RPC-18、MCI柱层析,半制备HPLC,葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)柱层析等多种分离材料和技术对黔产山蜡梅进行分离和纯化,结合化合物的理化性质及1D-NMR核磁共振波谱、质谱等波谱数据,对化合物进行结构鉴定;2.改良寇氏法测定阴干、烘干、蒸制、炒炭不同处理后的山蜡梅根粉对昆明小鼠的半数致死量(LD50),评价其对小鼠的急性毒性。3.以Welch-C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),乙腈-水为洗脱剂梯度洗脱,流速1.0 m L/min,检测波长214 nm,柱温30℃,建立HPLC同时测定东莨菪苷、秦皮苷、东莨菪内酯、异嗪皮啶含量的方法。结果:1.从山蜡梅中共分离鉴定得到13个化合物,分别是:(1)β-谷甾醇,(2)东莨菪内酯,(3)异嗪皮啶,(4)东莨菪苷,(5)秦皮苷,(6)d-夏蜡梅碱,(7)Xeroboside,(8)6,7-二甲氧基香豆素(9)Nitensoside A,(10)丁香酸葡萄糖苷,(11)7-O-(6-O-syringoyl-β-D-glucopyranosyl)-6-methoxycou-marin,(12)liriodendrin,(13)5,6,7-三甲氧基香豆素。2.阴干品、烘干品、蒸制品对昆明小鼠的LD50依次分别为4118.13 mg/kg、3733.36 mg/kg、1643.61 mg/kg,95%可信限分别为3748.87 mg/kg~4523.76mg/kg、3422.16 mg/kg~4072.86 mg/kg、1520.90 mg/kg~1776.23 mg/kg,炒炭对昆明小鼠的LD50>10 000 mg/kg。3.东莨菪苷、秦皮苷、东莨菪内酯、异嗪皮啶的检测线性范围分别为0.019μg~1.856μg、0.016μg~1.616μg、0.010μg~0.920μg、0.006μg~0.624μg(r2均≥0.999 5),精密度、稳定性、重复性试验的RSD均<2.0%(n=6);平均加样回收率分别为104.47%、102.20%、101.45%、99.24%(RSD均<1.63%,n=6),不同加工炮制方法中上述4种成分含量分别为东莨菪苷1.12%、0.90%、1.07%、0.04%,秦皮苷0.87%、0.45%、0.42%、0.02%,东莨菪内酯0.08%、0.16%、0.08%、0.29%,异嗪皮啶0.11%、0.20%、0.21%、0.25%。结论:1.从山蜡梅中分离鉴定的13个化合物中,包含9个香豆素类化合物,1个生物碱类化合物,1个木脂素类化合物,1个糖苷类化合物及1个其他类化合物。其中化合物10、11、12为首次从该属植物中分离得到。2.不同加工处理方式对山蜡梅根毒性有影响,经炒炭处理后,其药材毒性显著降低。3.HPLC法重复性、精密度较好,可用于测定不同加工处理后山蜡梅中东莨菪苷、秦皮苷、东莨菪内酯、异嗪皮啶4种成分的含量。与阴干品相比较,烘干、蒸制、炒炭后山蜡梅根4种成分含量均有所变化。以上研究结果丰富了山蜡梅药效物质基础,为山蜡梅应用开发提供了科学依据。
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