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上篇:RhoA、RhoC及其效应分子ROCK-I的表达与卵巢癌细胞恶性行为的相关性.目的:研究RhoA、RhoC及其效应分子ROCK-I在4种卵巢癌细胞中的表达水平,探讨它们与卵巢癌转移的相关性.方法:RT-PCR检测RhoA、RhoC及ROCK-I在卵巢癌细胞SW626、Skov-3、A2780和Caov-3中mRNA的表达水平;Western blot法检测RhoA和ROCK-I蛋白质的表达情况;划痕试验和Boyden小室体外侵袭试验测定4种卵巢癌细胞的体外迁移与侵袭能力.结果:RhoA、RhoC和ROCK-I在4种卵巢癌细胞中呈不同程度表达,其中仅RhoC的表达水平与癌细胞侵袭力和迁移能力呈正相关(r=0.95,P<0.01).RhoA在转录水平和蛋白水平不呈同步变化,且RhoA和RhoC的表达与ROCK-I的表达无相关性.4种卵巢细胞的体外侵袭和迁移能力相一致,其中SW626最强,Caov-3最弱,Skov-3和A2780居中.结论:RhoC的表达与卵巢癌细胞的体外侵袭和迁移能力相关,可能作为一个独立因素在卵巢癌的转移过程中起作用,有望成为阻断卵巢癌转移的新靶点.下篇:第一部分ROCK-I的活性的改变对卵巢癌细胞恶性表型的影响.目的:以人卵巢癌细胞SW626、Skov-3、A2780与Caov-3为实验对象,探索ROCK-I的活性的改变对卵巢癌细胞恶性表型的影响.方法:将携带ROCK-I的显性激活突变体(pCAG-myc-p160△3)的质粒以脂质体介导,转染4株人卵巢癌细胞系,采用RT-PCR与Western blot检测转染后ROCK-ImRNA和myc-p160△3蛋白的表达,Boyden小室观察ROCK-I ASODN对4株细胞侵袭及迁移能力的影响,MTT比色法测定转染前后细胞增殖及粘附能力的变化.结果:脂质体介导的pCAG-myc-p160△3转染后,4株细胞内有明显的p160△3 mRNA的表达,myc-p160△3融合蛋白亦获得较高的表达;4株细胞的侵袭能力与对照组比较分别提高31.1％、33.0％、24.5％和39.4％;随机运动能力分别提高31.9％、31.5％、23.0％和38.7％;定向运动能力分别提高33.9％、33.0％、25.0％和40.2％.各株细胞的体外粘附能力及增殖能力未显示出明显的变化.结论:ROCK-I的活性与人卵巢癌细胞的体外侵袭与迁移能力密切相关,ROCK-I活性的提高可显著地增强卵巢癌肿瘤细胞的转移能力.第二部分ROCK-I反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞恶性行为的改变.目的:探索ROCK-I蛋白的表达在卵巢癌转移中的作用.方法:以脂质体介导,将ROCK-I反义寡核苷酸(ASODN)转染人卵巢癌细胞SW626与Caov-3,采用RT-PCR与Western blot检测转染前后ROCK-I蛋白的表达,Boyden小室观察ROCK-I ASODN对SW626与Caov-3细胞侵袭及迁移能力的影响,MTT比色法测定转染前后细胞增殖及粘附能力的变化.结果:脂质体介导的ROCK-I ASODN转染后,两株细胞内ROCK-I mRNA和蛋白质的表达明显减少,最大抑制率可达49％;细胞的侵袭能力受到明显的抑制.10μmol/L组和20μmol/L组SW626细胞的侵袭能力分别为对照组的75.6％和54.7％,Caov-3为68.8％和50.0％;转染两种浓度ASODN的SW626与Caov-3细胞的随机运动能力分别为对照组的80.0％、63.7％、72.0％和55.9％;定向运动能力分别为对照组的83.9％、64.1％、72.5％和54.5％.两株细胞的体外粘附能力及增殖能力未显示出明显的变化.结论:ROCK-I蛋白的表达的改变与人卵巢癌细胞的体外侵袭与迁移密切相关,阻断ROCK-I的表达可有效地抑制卵巢癌肿瘤细胞的转移.