在Vc两步发酵工艺中,第一步为醇糖转化,由醋酸菌(如氧化葡萄糖杆菌)转化D-山梨醇产生L-山梨糖;第二步是糖酸转化,由普通生酮基古龙酸菌(行业上俗称小菌)及其伴生菌(俗称大菌)组成的混合菌系将L-山梨糖转化为维生素C的前体2-酮基-L-古龙酸(KGA)。小菌为产酸菌,单独培养生长缓慢,需要在伴生菌的辅助下才能正常生长和产酸。实验过程中发现了一种生长迅速且能从山梨糖产酸的菌株,我们称为快生小菌。通过菌株分离、分类鉴定和16S rDNA分析等方法,初步认定此菌为小菌和乙酸钙不动杆菌的融合株,此菌株传代过程中易丢失小菌的基因组转变成乙酸钙不动杆菌。我们利用穿梭质粒pWH1266做载体,构建了pWH1266-sdh,以乙酸钙不动杆菌做宿主尝试表达山梨糖脱氢酶SDH,没有检测到SDH活性,但质粒回转入大肠杆菌可以检测到SDH活性。构建了pET-cytc、pGEX-KG-sdh质粒,表达并纯化了细胞色素C(cytC)和山梨糖脱氢酶(SDH),并利用GST pull-down方法研究了SDH与cytC在体外的相互作用,发现二者之间存在结合作用,但实验重复性差,受多种因素影响。分析了各种碱基、叶酸、二氢叶酸和大菌裂解液对小菌生长的影响。对大菌中促进小菌生长的物质进行了初步分离和鉴定,认定这种物质为热不稳定的大分子,可能是蛋白质。