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背景和目的:肺癌在我国的发病率和死亡率均较高,因其具有生长快、转移早、易复发的特性,使得目前临床总体治疗效果较差。在以往的研究中发现,肿瘤的生长和转移主要依赖新血管的生成,但是目前临床使用的抗肿瘤血管生成药物还很少,且临床效果尚不能令人满意。热休克蛋白 A12B(heat shock protein A12B,HSPA12B)是热休克蛋白 70(heat shock protein 70,HSP70)蛋白家族中的新成员,主要特异性表达在血管内皮细胞上,在体外实验中可促进血管内皮细胞增殖、迁移及诱导血管生成,因而推测高表达HSPA12B可能在肿瘤组织血管新生过程中起到重要的作用。课题组前期已经证实,过表达HSPA12B可显著促进肺癌生长,提示HSPA12B是一个新的、促进肺癌生长的调节分子,但HSPA12B是如何促进肺癌生长的还不清楚。本研究将在前期工作基础上,利用高表达HSPA12B转基因小鼠构建Lewis肺癌模型,探讨HSPA12B促进肺癌生长的机制,以更加全面地认识肺癌生长的调节机制,为肺癌的早期诊断、治疗,提供新的思路和理论依据。方法:1.实验动物:高表达人类HSPA12B基因的转基因小鼠品系(transgenic mouse,Tg)是由本实验室课题组和南京大学模式动物研究所共同构建,饲养于南京大学模式动物研究所的SPF级动物房中,对照实验所用小鼠品系为一窝所生的野生型小鼠(Wild type,WT)。2.肺癌模型:采用8-10周龄的Tg鼠及同窝出生的WT鼠,经尾静脉注射Lewis lung cancer(LLC),细胞数为 1.5 × 105 个/鼠。3.肿瘤表型分析:LLC细胞注射后18天,将小鼠以过量戊巴比妥麻醉、处死,开胸、分离肺脏,拍照。然后分离肺部肿瘤,计数、称重。4.Cox-2抑制试验:LLC注射后,小鼠喂以含有Cox-2特异性抑制剂Celecoxib(Cele)的食物(1.5 g/kg),直至实验结束。5.蛋白质表达分析:LLC细胞注射后18天,收集肺肿瘤组织,将注射生理盐水的小鼠肺组织设为对照组。蛋白质水平分析按照常规Westerm blot步骤进行。6.肺癌组织中细胞凋亡:LLC细胞注射后18天,收集肺肿瘤组织,制成石蜡切片,进行TUNEL免疫荧光染色,Hoechst33342进行细胞核染色,细胞凋亡程度以TUNEL阳性细胞核/总细胞核的%表示。7.统计学处理.:数据均采用均数±标准差表示,组间比较采用单因素方差分析(ANOVA),P<0.05代表差异有统计学意义。结果:1.HSPA12B Tg鼠肺部肿瘤个数、重量显著多于WT鼠;2.HSPA12B Tg鼠肺肿瘤组织中的细胞凋亡数显著少于WT鼠;3.HSPA12B Tg鼠肺肿瘤组织中细胞增殖数显著多于WT鼠;4.HSPA12B Tg鼠肺肿瘤组织中Cox-2表达水平显著高于WT鼠;5.Cox-2选择性抑制剂Celecoxib显著抑制HSPA12B Tg鼠肺肿瘤生长;6.Cox-2选择性抑制剂Celecoxib显著增加HSPA12B Tg鼠肺肿瘤组织中细胞凋亡。结论:HSPA12B可促进肺癌的生长,其机制是通过Cox-2介导的。