凝血酶是人体中重要的丝氨酸蛋白质,在血栓栓塞性疾病、癌症和阿尔茨海默病等不同疾病的病理和生理凝血中发挥着关键作用。凝血酶浓度过高会导致血栓,而生成量降低会导致出血。因此,建立一种灵敏、高效的检测方法用于诊断因凝血酶含量异常而引起的疾病是非常有必要的。电化学生物传感器是由生物识别材料和检测器件组成的,它对生物物质敏感并且能够将检测物质的浓度转换为电化学信号从而实现检测目的的一种装置。与其他电化学传感器相比,由于具有诸多优点,如灵敏度高、选择性好、操作简单、检测成本低、响应速度快,使得电化学生物传感器的应用越来越广泛。近些年来,适配体成为越来越多人的研究热点。它是一种典型的人工单链DNA或RNA,其最显著的特征是具有高的结合亲和力和特异性。适配体可以结合各种目标,如重金属离子、蛋白质、病毒和癌细胞等,具有以下优点:在体外快速合成,易于修饰,不影响其生物活性,无免疫原性,无毒,高组织通透性和高稳定性。为此,本论文采用亲和性好、特异性高的适配体和电化学活性物质为生物识别元件。结合主客体识别作用和催化发夹组装进行信号扩增,成功构建了高灵敏、高特异性的电化学适体传感器,并且实现了凝血酶的半定量或定量检测。实验结果显示,本论文构建的电化学适体传感器对凝血酶检测具有较高的灵敏度和选择性,成功用于血清样本中凝血酶的快速检测。实验结果表明构建的适体传感器具有潜在的临床应用价值。本论文的研究工作主要分为以下两个部分:（1）基于四二茂铁与β-环糊精（β-CD）之间的主客体识别作用,构建了一款均相的电化学适体传感器,并成功用于凝血酶的快速检测。在本章中,首先合成了一种新型的二茂铁衍生物-四二茂铁,其含有四个二茂铁单元,将其修饰在双发夹DNA探针的两端,形成一个具有高效获得信号功能的凝血酶适配体（TBA）。通过自组装的方法,将合成的巯基β-环糊精（SH-β-CD）固定在金电极（Au E）表面。在没有凝血酶存在的情况下,TBA的双茎环结构阻碍了两端标记的四二茂铁进入到金电极表面的β-CD空腔内。当TBA与凝血酶结合后,TBA的茎环结构打开,转化为特殊的G-四链体结构,此时TBA两端修饰的四二茂铁与β-CD发生主客体识别并进入其空腔内,因此能直接检测到放大的电流信号。所构建的适体传感器实现了对凝血酶的灵敏、快速检测,线性范围为4 p M～12.5n M,检测限为1.2 p M（S/N=3）。（2）基于目标引发的催化发夹组装（CHA）技术和四二茂铁与β-CD主客体识别双重信号扩增策略,构建了一款用于检测凝血酶的电化学适体传感器。该传感器由两个部分组成,一部分是检测基底,将SH-β-CD修饰在金电极表面构成检测基底,可以产生稳定的电流信号;另一部分是识别探针,探针的一个发夹结构具有凝血酶的特异性识别基因,并将合成的四二茂铁修饰在双发夹探针中。目标凝血酶与适配体探针发生特异性识别,通过CHA反应将凝血酶替换下来再进行下一个识别反应,因此低浓度的凝血酶就能得到加倍增强的电化学响应信号。该电化学适体传感器基于CHA技术和电化学活性物质四二茂铁与β-CD主客体识别作用的原理,显著扩增了凝血酶的电化学信号,实现了对凝血酶的灵敏检测。该电化学适体传感器在凝血酶浓度为1 p M-3.125 n M的范围内呈现出良好的线性关系,检出限为0.28 p M（S/N=3）。本课题主要选取了研究最多的凝血酶作为分析对象,构建了两款电化学适体传感器,主要有以下优点:1)构建的适体传感器均是在均相溶液中进行检测的,并且不需要将适体探针固定在电极表面,大大降低适体探针与目标凝血酶之间的空间位阻,提高了识别效率;2)合成的新型电活性物质物不需要酶等外加底物就能直接获得电化学信号,简化了实验操作,降低了成本,为传感器的开发提高了新的电活性物质;3)反应体系中不需要酶的加入,没有使用纳米材料,并且在其它干扰蛋白存在的情况下能与目标凝血酶特异性识别。