论文部分内容阅读
脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）广泛存在于世界范围内的谷物及其制品中,并可引起人和动物中毒,但其作用机制至今仍不十分清楚。本实验以不同组织来源的细胞为研究对象,从细胞毒性、凋亡形态学和早期凋亡检测三方面来比较细胞对DON的敏感性,为进一步研究DON诱导细胞凋亡的机制奠定基础。实验一:本试验采用不同组织来源的细胞（BHK-21、PIEC、HT-29、CHO-K1、BGC-823、BT-325和HL-7702）为研究对象,用不同浓度的DON（DON终浓度分别为125 ng/mL,250 ng/mL,500 ng/mL,1000 ng/mL,2000 ng/mL）处理不同时间（24 h、48 h和72 h）后,通过MTT分析法测定细胞增殖的变化,对比各细胞的敏感性。结果显示:不同浓度的DON均可抑制细胞的增殖,剂量越大抑制率越高,且与对照组相比差异极显著（P＜0.01）。500～2000 ng/mL浓度组,除CHO-K1 48 h和72 h段结果相近外,其它细胞三个时间段的抑制率呈显著的时间效应关系（P＜0.05）。各时间段1000和2000 ng/mL组抑制率相比较,除了BGC-823和BT-325外,其它细胞的差异不显著。由IC50结果得出BHK-21是最敏感的细胞,HL-7702敏感性最低。DON处理24 h时BHK-21的IC50为333ng/mL,其它六种细胞均大于2000 ng/mL。48 h测定结果从高到低依次为BHK-21＞PIEC＞HT-29＞CHO-K1＞BGC-823＞BT-325＞HL-7702。IC50分别为320,361,598,620,1048,1485,＞2000 ng/mL。72 h的检测结果从高到低依次为:BHK-21＞PIEC＞HT-29＞CHO-K1＞BT-325＞BGC-823＞HL-7702,IC50分别为228,238,438,678,832,908,＞2000 ng/mL。结论:DON对七种细胞均有毒性。根据细胞来源不同,毒性大小也有差异。DON的细胞毒性存在时间和剂量效应关系,并且与细胞的生长速度有关。BHK-21是所选细胞系中对DON最敏感的的细胞,HL-7702敏感性最低。实验二:本实验采用不同组织来源的细胞（BHK-21、PIEC、HT-29、CHO-K1、BGC-823、BT-325和HL-7702）为模型,用不同的浓度DON（DON的终浓度分别为125 ng/mL,250 ng/mL,500 ng/mL,1000 ng/mL,2000 ng/mL）处理24 h。染色后作形态学观察和流式细胞仪测定凋亡率,对比细胞对DON的敏感性。并用彗星实验验证DON对敏感细胞的DNA损伤情况。结果显示:不同浓度DON对七种细胞均有诱导凋亡的作用。细胞的形态变化和凋亡率与DON呈显著的剂量效应关系。除BGC-823的125 ng/mL组外,每种细胞各浓度组的凋亡率都显著高于对照组（P＜0.05）。细胞坏死率所占百分比均小于5%,且各细胞的凋亡率均在2000 ng/mL剂量组达到最高。结论:DON对所选七种细胞均有诱导凋亡的作用,DON对细胞形态学变化和诱导凋亡作用与毒素剂量、细胞来源细胞生长速度和细胞毒性有关。DON诱导细胞凋亡的敏感性顺序从高到低依次为HT-29＞BHK-21＞BT-325＞PIEC＞BGC-823,CHO-K1,HL-7702。DON对HT-29的DNA损伤与凋亡检测结果一致。HT-29细胞可用于深入研究DON诱导细胞凋亡的机制。