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实验目的 明确并比较中国HIV感染者与健康人NK细胞表面CD56、CD16表达情况。 明确并比较中国HIV感染者CD4+T淋巴细胞的数量与NK细胞数量的关系。 明确中国HIV感染者NK细胞数量与疾病进展的关系。 实验材料与方法 1．研究对象： 27例无症状HIV感染者/AIDS病人，依据《全国艾滋病检测工作规范》标准，由本院艾滋病确认实验室通过蛋白印记法判定为HIV抗体阳性。感染HIV时间1～9年，均未接受过抗HIV病毒治疗。HIV血清阳性患者按1993年美国CDC艾滋病监测病例分类及扩大的诊断标准分为无症状HIV感染组（CD4+T淋巴细胞≥200/μl，Al，A2期）及艾滋病组（CD4+ T淋巴细胞＜200/μl，A3，B3，C3期）。8例健康对照为随机抽取的HIV抗体阴性、未暴露于HIV的健康人，其中男性5名，女性3名，平均年龄为35±5岁。见表1。 2．实验材料： 流式细胞仪（FACSCalibur）、CD4绝对计数管、免洗溶血素及下列各种单克隆抗体：7riTEST CD4/CD8/CD3试剂（SK3、SK1、SK7克隆）、FITC标记的抗CD56单抗、PE标记的抗CD16单抗和PerCP标记的抗CD3单抗（BEC-TON DICKINSON公司）。 3．CD4绝对值计数： 将20μlCD4/CD8/CD3Tri7EST试剂加入CD4绝对计数管中，加入50μl抗凝血，室温避光15min，加入免洗溶血素450μl，室温避光15min，FACSMULTISET软件检测并进行自动分析，计算CD4+、CD8+、CD3+T淋巴细胞绝对值及相应比值等。 4.全血细胞表面受体染色: 用FITC/PE/Pe沈P标记单抗组合进行无症状HIV感染者和AIDS患者外周抗凝全血三色分析:CD56/CD了CD。。另设1管不加抗体，1管只加FITC标记的CD4单抗。加人80闪抗凝血，按上述组合依次加人不同单抗各6闪，室温避光30而n。加人溶血素3血，室温，1200r/而n离心5而n，弃上清液。加人3时PBS悬浮，室温，1 200r/min离心5而n，弃上一清液，洗涤2次。加人1%多聚甲醛的PBS 500闪悬浮，FACS CELLQUEST软件进行检测分析。 5.流式细胞仪分析: 用三色荧光标记法流式细胞技术测定的激发光为氢离子激光488nm谱线，使用前向散射角（FSC）及侧向散射角（SSC）确定淋巴细胞群，再分别以CD3一淋巴细胞为门，分析NK细胞表面CDS。十、CD16十、CDS。十CD，6‘的表达。 6.统计学分析: 用SPSSn .1统计软件包进行统计学分析。两组的NK亚群百分比用t检验作均值比较。实验结果 1.无症状HIV感染组NK细胞亚群百分数的变化: 无症状HIV感染组CD56‘CD16‘CD3一NK细胞亚群在CD3一淋巴细胞群所占百分比（平均值24.69%）低于健康对照（平均值39.99%，P<0.05）;cDS。一CDI。‘CD。一NK细胞亚群百分比（平均值12.58%）高于健康对照（平均值6.51%，P<0.01）;CD*子eD16一CD。一NK细胞亚群百分比（平均值6.75%）与健康对照（平均值4.21%）相比差异无显著性（P>0.05）。见图1，2。 2.艾滋病组NK细胞亚群百分数的变化: 艾滋病组CD56+CD，6+CD3一NK细胞亚群在CD3一淋巴细胞群所占百分比（平均值24 .90%）低于健康对照（平均值39.99%，P<0.05）;CD、-cDI。‘cD。一NK细胞亚群百分比（平均值巧.47%）高于健康对照（平均值6.51%，P<0.05）;eDS。十CD:。一CD3一NK亚群百分比（平均值3.50%）与健康对照（平均值4.21%）相比差异无显著性（P>0.05）。见图1，2。 3.无症状HIV感染组与艾滋病组NK细胞亚群百分数的比较: 艾滋病组的CD56+CD16一CD3一NK细胞亚群在CD3一淋巴细胞所占百分比（平均值3.50%）低于无症状HIV感染组（平均值6.75%，P<0.05），CD56‘CD，6‘CD3一NK亚群百分比（平均值24.90%）与无症状HIV感染组（平均值24 .69%）相比差异无显著性（p>0 .05），CDS。一CDI。‘en，一NK亚群百分比（平均值巧.47%）与无症状HIV感染组（平均值12.58%）相比差异无显著性（P>0.05）。见图l，2。 4.NK细胞亚群与CD;+T淋巴细胞绝对计数相关分析: 本试验将HIV感染者和AIDS患者的不同NK细胞亚群百分比分别与CD4十T细胞绝对数量进行相关分析发现，AIDS患者的CD56‘CD16一CD3-NK亚群百分比与CD4十T淋巴细胞绝对计数呈正相关的线性关系（r=0.6，P<0.05）。见图3。结论 1.我国无症状HIV感染者/AIDS患者CD56‘CD16‘CD3一NK细胞亚群数量降低。 2.我国无症状HIV感染者/AIDS患者CDS。一CD16‘CD3一NK细胞亚群数量增高。 3.我国AIDS患者CD56+CD，6一CD3一NK亚群数量与以CD4‘T淋巴细胞绝对数为代表的疾病进程密切相关。