【摘 要】
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该研究通过对GenBank中cry1类基因序列的保守区进行分析,设计一对针对其保守区的引物Y5-1(AGGACCAGGATTTACAGGAGG)和Y3-1(GCTGTGACACGAAGGATATAGCCAC),对苏云金芽胞杆菌(Baci
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该研究通过对GenBank中cry1类基因序列的保守区进行分析,设计一对针对其保守区的引物Y5-1(AGGACCAGGATTTACAGGAGG)和Y3-1(GCTGTGACACGAAGGATATAGCCAC),对苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)新菌株S184质粒DNA进行扩增,得到一大小为1.4kb的DNA片段,序列分析显示该片段与cry1类基因高度同源.以此片段为探针,对S184质粒DNA酶切片段进行Southern杂交,在SalI、SacI、SacI+SalI限制性酶切片段5-kb处理只有唯一的阳性信号.将SacI 5-kb片段克隆至pBluescript M13-上得到重组质粒pB1Ab然后进行亚克隆及部分序列测定,结果表明所克隆的片段含有cry1Ab,然后进行亚克隆及部分序列测定,结果表明所克隆的片段含有cry1Ab亚类基因.另外,根据已发表的cry1C核苷酸序列,设计了一对扩增cry1C全长基因的引物Y5-1Ca(ATGGAGGAAAATAATCAAAATCAATG)和Y3-1Ca(CTTATTCCTCCATAAGGAGTAATTCCACGCTA),用长模板PCR系统从Bt新菌株A<,2>F中扩增cry1C全基因,并克隆到pGEM<>-T easy载体上,序列测定结果显示,所得3581bp序列与已知的cry1Ca基因有11个核苷酸差异和7个氨基酸差异,因此认为是新的cry1Ca基因,命名为cry1Ca6.
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