昆虫主要通过Toll和IMD这两个经典的信号转导途径来应答病原微生物的感染。近年来有报道表明无病原物感染时,20E也可以参与调控抗菌肽的合成,关于20E调控抗菌肽合成机制的报道有很多,但具体调控机制却尚不清楚。我们在前期研究中发现,家蚕蜕皮激素调控蛋白(Esr16)可以结合脂多糖(LPS)并诱导抗菌肽Moricin和Cecropin的表达,参与到先天免疫中。那么BmEsr16是否能被20E调控参与到家蚕的体液免疫中呢?基于这一问题,我们选择以鳞翅目昆虫家蚕为代表进行了初步研究,具体内容如下:(1)研究自然发育状态下家蚕BmEsr16是否于20E的滴度水平存在协同关系;(2)外源20E分别处理家蚕活体、离体培养的脂肪体和中肠及家蚕BmN细胞后,用Western blot和RT-qPCR分别检测BmEsr16在蛋白和mRNA水平上的表达;(3)生物信息学分析BmEsr16的结构及启动子序列,寻找受20E调控的靶转录因子,并用双荧光素酶实验进行启动子活性检测。通过以上实验的研究,得到了以下结果:(1)生物信息学分析BmEsr16蛋白,发现BmEsr16蛋白存在一个与人Npc2蛋白类似的结构域,都属于ML蛋白超家族,且存在3个潜在的胆固醇或者脂质结合位点,暗示BmEsr16可能参与到家蚕的脂类结合及代谢中。(2)Western blot和RT-qPCR检测自然发育状态下家蚕脂肪体和中肠BmEsr16的表达,发现BmEsr16的转录表达活性与20E滴度水平呈现同样的趋势,在5龄2d至游走期(W)其表达量较低,随着20E滴度升高,BmEsr16在RNA和蛋白水平上皆上调表达。(3)向5龄4d的家蚕注射不同剂量的20E,取脂肪体和中肠进行Western blot和RTqPCR检测发现,10μg/头的20E注射家蚕12h后,脂肪体和中肠中BmEsr16的表达量会被显著上调。(4)用外源20E处理离体培养的家蚕脂肪体,当20E浓度为5μg/mL时,BmEsr16的转录表达量被显著上调。(5)用20E处理家蚕BmN细胞,20E初级应答因子E75A被显著上调表达,但是BmEsr16的转录表达没有显著变化。暗示只有在家蚕活体水平上,BmEsr16才能响应20E的诱导,提高其转录表达活性。(6)分析BmEsr16上游启动子区域,搜索到6个可能的受蜕皮激素调控的转录因子结合位点,分别是BR-C Z1(1个)、BR-C Z2(1个)、BR-C Z4(2个)、E74A(1个)、EIP74EF(1个)结合位点。PCR扩增获得全长启动子序列后,又通过重叠PCR技术克隆获得截短型及缺失型启动子,并将其克隆至荧光素酶载体pGL3-Basic上,获得含有全长型、截短型和突变型启动子的重组质粒。综上表明,20E处理家蚕活体和离体培养组织会引起BmEsr16表达量上调,为进一步研究20E与先天免疫的关系奠定基础。