鸡源性多重耐药沙门氏菌转座子与耐药相关性分析

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沙门氏菌是医学和兽医临床上最常见的病原菌之一,也是条件性致病菌和体内共生菌,其所带来的危害是十分严重的。随着抗生素在临床上的广泛应用,沙门氏菌的耐药问题日趋严重。由于许多编码耐药性的基因可在动物和人类病原菌间相互转移和传播,造成耐药水平越来越高,严重危害养殖业和人类健康。因此,研究可移动遗传因子在在沙门氏菌多重耐药性产生与传播的作用具有重要的临床意义和流行病学价值。本研究经分离鉴定获得23株鸡源沙门氏菌,其中有10株对2种或2种以上抗菌药物表现耐药,为多重耐药沙门氏菌;应用PCR技术对10株多重耐药沙门氏菌进行转座子和相关耐药基因的检测,旨在分析转座子和耐药基因与沙门氏菌多重耐药的关系,从而为控制耐药性传播及预防多重耐药产生提供理论依据。从哈尔滨周边地区养鸡场分离得到沙门氏菌疑似菌株,通过生化反应进行初步鉴定,采用玻片凝集法进行血清型鉴定,确定23株为沙门氏菌。根据NCCLS推荐的标准,采用K-B纸片法对23株临床分离菌株进行了10种抗菌药物的敏感性试验。结果显示,试验菌株对四环素的耐药率最高,达到34.78%;其次为氨苄西林、环丙沙星和庆大霉素,耐药率分别30.43%、27.74%、27.74%;耐药率最低的是头孢唑啉,仅为8.70%。其中有6株对5种以上抗菌药物耐药,10株对2种或2种以上抗菌药物耐药,多重耐药率为43.48%(10/23),主要的多重耐药谱为TET-AMP-SXT-NOR-GEN-CIP。应用PCR的方法检测10株多重耐药沙门氏菌携带的耐药基因和转座子的情况,分析分离株的耐药基因和转座子之间关系。根据GenBank中发表的耐药基因的序列,设计11对引物用于扩增耐药基因blatem-1、blaCMY-2、tetA、tetB、tetG、sul1、sul2、aadA1、catI、dfrA1、qnr,设计5对引物扩增转座子tnpA、tn1721、tnp513、tnpU、IS26,对10株多重耐药菌株进行耐药基因和转座子的检测。在10株多重耐药沙门氏菌中检测到11种耐药基因,其中以tetA、tetB、Blatem-1检出率最高,其次是dfrA1、sul2、sul1,并且耐药谱越广所含耐药基因越多,PCR检测耐药基因的结果与其耐药表型基本一致。测序结果显示,各耐药基因序列与预期序列高度同源。本试验共检测到4种转座子,其中IS26检出率最好为80%,其次为tnpA和体内1721为60%,tnp513检出率最低位30%,而转座子tnpU并未检出;转座子检出率越高则耐药率越高。通过质粒接合试验验证10株多重耐药沙门氏菌转座子的可移动性,结果表明:含有转座子的耐药菌经接合后,接合成功的结合子中均检出转座子,说明转座子可携带耐药基因以质粒为载体,在不同菌种之间进行传播,使其编码的抗菌药物抗性进行水平传递。耐药基因在接合过程也随转座子发生了转移,赋予被接合细菌新的耐药性。本试验成功筛选出了10株鸡源多重耐药沙门氏菌,通过PCR技术检测出了耐药基因和转座子,质粒接合试验证明了转座子携带耐药基因在种间或种内进行转移的可移动性。本研究为沙门氏菌多重耐药机制的进一步研究提供了理论参考。
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