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人类组织因子途径抑制因子（TFPI）是外源性凝血途径的主要抑制因子，具有抑制FXa和FⅦa-TF复合物的功能，是机体主要的抗凝血因子之一。由于TFPI兼具抑制血栓形成、平滑肌细胞增殖和单核细胞趋化的三重功能，因此在血管再狭窄的防治中具有很好的应用前景。本实验构建组织因子途径抑制因子（TFPI）真核双表达载体，以为TFPI基因治疗用于防治血管再狭窄的研究提供有效手段。
本实验以含有全长cDNA的pIRES-TFPI为模板，PCR扩增TFPI全长cDNA，经酶切后插入到pIRES2-AcGFP1-Nuc载体中，构建成双顺反子真核表达载体，重组质粒经酶切图谱分析、PCR扩增及测序鉴定后命名为pIRES2-AcGFP1-Nuc-TFPI。将其转染NIH3T3细胞，分别采用荧光显微镜观察、RT-PCR及ELISA的方法检测GFP或TFPI在细胞内的表达。酶切图谱分析、PCR扩增及DNA测序证实双顺反子真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Nuc-TFPI构建正确；荧光显微镜检测到细胞内存在GFP蛋白的表达；RT-PCR证实经TFPI基因转染的细胞内TFPI mRNA表达增高；ELISA检测表明经TFPI基因转染细胞培养上清中存在TFPI蛋白，显示TFPI蛋白能够正常分泌到细胞外。
本实验运用基因工程技术，成功构建了包括人类组织因子途径抑制因子和绿色荧光蛋白的真核双表达载体，使得人类组织因子途径抑制因子和绿色荧光蛋白的基因从同一个双顺反子mRNA互不干扰地同时表达，实现了通过观察绿色荧光蛋白即可确定人类组织因子途径抑制因子表达的目的，并保证细胞内表达的人类组织因子途径抑制因子能有效分泌到细胞外，为人类组织因子途径抑制因子用于疾病防治研究提供了有效研究工具。