【摘 要】
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双氢睾酮(Dihydrotestosterone,DHT)是一种非芳香化5α还原性雄激素,主要由睾酮和雄烯二酮在5α还原酶(5α-reductase,5α-red)的作用下合成。雌性动物卵巢中DHT的浓度远高于血液,说明其在雌性动物生殖系统中可能也发挥特定的生理调节作用。然而,关于DHT在小尾寒羊有腔卵泡发育过程中的合成及调控卵泡发育的机制研究较少。因此,本实验体外培养了小尾寒羊有腔卵泡颗粒细胞,
【基金项目】
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甘肃农业大学科技创新基金(学科建设基金)“双氢睾酮在绵羊卵泡中的合成及调节”(No. GAU-XKJS-2018-58);
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双氢睾酮(Dihydrotestosterone,DHT)是一种非芳香化5α还原性雄激素,主要由睾酮和雄烯二酮在5α还原酶(5α-reductase,5α-red)的作用下合成。雌性动物卵巢中DHT的浓度远高于血液,说明其在雌性动物生殖系统中可能也发挥特定的生理调节作用。然而,关于DHT在小尾寒羊有腔卵泡发育过程中的合成及调控卵泡发育的机制研究较少。因此,本实验体外培养了小尾寒羊有腔卵泡颗粒细胞,检测FSH和LH对小尾寒羊有腔卵泡颗粒细胞中DHT合成及受体的影响,并且检测了DHT对小尾寒羊有腔颗粒细胞E2分泌、雌激素受体和细胞凋亡的调控机制。获得了如下结果:(1)小尾寒羊有腔卵泡不同阶段DHT合成及雄激素受体(Androgen receptor,AR)的表达情况。将小尾寒羊有腔卵泡按其直径大小分为小(≤2mm),中(2-5mm)和大(≥5mm)卵泡,检测5α-red1、5α-red2和AR在小尾寒羊有腔卵泡颗粒细胞中表达。随着卵泡直径的增加,卵泡颗粒细胞沉淀中5α-red1和5α-red2表达上升,但AR蛋白表达及DHT水平下降。(2)FSH和LH对小尾寒羊颗粒细胞DHT,E2分泌及AR表达的影响。随着FSH(0.01-1IU/m L)和LH(0.01-1IU/m L)增加,小尾寒羊有腔卵泡颗粒细胞中5α-red1和5α-red2的表达上升,细胞培养液中的DHT浓度和AR的表达下降。同时,FSH和LH明显上调细胞培养液中E2的浓度及颗粒细胞中芳香化酶的表达。(3)检测有腔卵泡发育阶段E2浓度及相关蛋白的表达情况。在小尾寒羊有腔卵泡颗粒细胞中发现E2合成酶和受体的表达,且随着卵泡直径的增加,E2浓度、E2合成酶和雌激素受体表达均显著上升。(4)DHT对体外培养的小尾寒羊有腔卵泡颗粒细胞E2分泌及雌激素受体表达的调控机制。不同浓度的DHT(10-10-10-7M)对小尾寒羊有腔卵泡颗粒细胞中E2合成酶和受体表达有影响,且这个作用可被AR抑制剂氟他胺(Flutamide,Flu)(10-7M)部分阻断,说明至少部分通过AR介导参与小尾寒羊有腔卵泡颗粒细胞中E2合成酶和受体表达的调控。(5)小尾寒羊有腔卵泡颗粒细胞凋亡的调控机制。随着DHT(10-10-10-7M)浓度的升高,卵泡颗粒细胞凋亡基因和蛋白表达均下调,且这一作用可被Flu(10-7M)阻断,说明DHT至少部分通过AR介导参与小尾寒羊有腔卵泡颗粒细胞凋亡基因和蛋白表达的调控。结论:(1)随着有腔卵泡的发育,DHT的合成及AR发生变化,且受到FSH和LH的调控;(2)DHT至少部分通过AR介导参与体外培养的小尾寒羊有腔卵泡颗粒细胞中E2分泌和受体表达的调控;(3)DHT至少部分通过AR介导参与小尾寒羊有腔卵泡颗粒细胞凋亡的调控。
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