布鲁氏菌病（Brucellosis）是由布鲁氏菌引起的一种在人畜之间广泛流行的细菌感染性疾病,在全世界广泛流传,从陆地到海洋均为其生态范围。迄今为止,用于治疗布鲁氏菌病的疫苗并不十分有效,预防效果不佳,患病生物的诊治方案多为使用抗生素医治或使用多种抗生素联合医治,但总体治疗成效不佳,患者复发概率大。虽然近年来对布鲁氏菌病的控制取得一定效果,但其对畜牧业和人类安全仍有不可忽视的危害,因此研究布鲁氏菌入侵及致病过程具有重要意义。本研究通过对Amelitensis M5-90菌液浓度及OD600nm进行线性拟合,得到其线性回归方程为 y=1E×1Ox+4E+06（R2=0.9997,0≤OD600nm≤1）。以确定的感染复数 MOI=100感染山羊成纤维细胞,确定二者的最佳共孵育时间为3 h,观察感染过程中山羊成纤维细胞的形态变化,从感染开始到细胞崩解经历的时间约为72 h,成功构建了B.melitensis M5-90感染山羊成纤维细胞的模型。以此为基础,提取未感染山羊成纤维细胞（阴性对照）和感染B.melitensis M5-90 4 h、24 h、48h、72 h山羊成纤维细胞的总RNA进行RNA-seq测序及小RNA测序,分析感染过程中mRNA及miRNA的动态变化过程。通过生物信息学分析,差异表达的mRNA基因数随着感染时间的增加明显增多,差异表达的miRNA中上调基因明显多于下调基因。经过GO及KEGG分析,发现差异表达的mRNA多聚类到细胞核、细胞外及核仁等GO term中,有3922个基因注释到307个KEGG pathway中;经过STEM分析,7298个差异表达的mRNA聚类到8种基因动态表达趋势,613个差异表达的miRNA基因聚类20种基因动态表达趋势。对表达持续上调及下调和富集在ko04060、ko04062两个信号通路的mRNA进行qRT-PCR验证并选取验证正确的核转录因子ⅣFKB1、干扰素受体IFNAR2、白细胞介素-10受体IL10RB、趋化因子CCL25为研究对象,选取表达持续上调和持续下调的miRNA进行联合分析,发现一共有19个miRNA存在对应关系,通过qRT-PCR验证,共有10个miRNA的表达趋势与小RNA测序结果基本保持一致。转染RNA mimics对二者之间的调控关系进一步验证,结果发现对应关系为bta-miR-744、chi-miR-25-5p、pc-5p-11241₄10、pc-5p-40217₇2 与 NFKB1;chi-miR-29a-5p_R+4、bta-miR-2285j_R+1 与 IFNAR2;cfa-mir-8903-p3、chi-miR-193b-5p 与IL1ORB。本试验为进一步探究布鲁氏菌侵染自然宿主山羊成纤维细胞的入侵及感染机制提供理论基础及布鲁氏菌病诊断和疫苗开发提供新的思路。