长链非编码RNA MACC1-AS1对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

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背景:长链非编码RNA MACC1-AS1是MACC1 mRNA的反义RNA,全长639bp,位于结肠癌转移相关基因-1(MACC1)的第六个内含子区域。但到目前为止,MACC1-AS1相关的生物学功能及其机制并不清楚。  目的:探讨MACC1-AS1的表达对人乳腺癌MDA-MB-231细胞系增殖、侵袭的影响。  方法:  (1)构建pCIP2-MACC1-AS1重组质粒,利用MS2衣壳蛋白可以与MS2结合位点(MS2bs)特异性结合的特点,构建pCIP2-MACC1-AS1-MS2bs重组质粒,以慢病毒为载体分别构建MACC1-AS1和MACC1-AS1-MS2bs稳定过表达的MDA-MB-231细胞系,用RT-PCR和Real time PCR检测两种稳定过表达细胞系是否构建成功。  (2)通过MTT实验和Transwell实验观察过表达MACC1-AS1对MDA-MB-231细胞增殖和侵袭的影响。  (3)通过Real time PCR检测MACC1-AS1对其正义链MACC1表达的影响。  (4)通过Real time PCR和原位杂交实验观察MACC1-AS1在细胞内的定位。  结果:  (1)成功构建MACC1-AS1和MACC1-AS1-MS2bs稳定过表达的细胞株及对照细胞株;  (2)MTT结果显示,对照组细胞增殖能力小于实验组 MDA231-MACC1-AS1(p<0.05);Transwell结果显示,在显微镜下观察穿过基质胶的细胞显示,对照组细胞穿过基质胶的细胞明显少于实验组MDA231-MACC1-AS1(p<0.05)。  (3)Real time PCR结果显示,MACC1-AS1可以抑制MACC1 mRMA的表达。  (4)Real time PCR和原位杂交结果显示,MACC1-AS1主要定位于细胞核。  结论:MACC1-AS1的表达与MDA-MB-231细胞增殖和侵袭之间存在正相关的关系,即MACC1-AS1过表达显著促进MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭。MACC1-AS1主要定位于细胞核,并且抑制MACC1 mRNA的表达。
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