目的:分析PKC-θ敲除对哮喘模型小鼠来源的脾CD4+T细胞全基因组甲基化的影响,为过敏性哮喘的治疗提供实验基础。方法:PKC-θ基因敲除C57BL/6小鼠20只,雌雄各半。其中10只小鼠分别于第0天、第7天、第14天腹腔注射200μL PBS缓冲液[含100μg卵清蛋白（OVA）和1 mg Al（OH）3]进行致敏。第15天,将小鼠置于自制封闭容器中,用含5%OVA和2%Al（OH）3的PBS缓冲液超声雾化吸入诱发哮喘,每天一次30min,连续7天。于第21天（最后一次雾化吸入24h内）处死（命名为KO-21d组）。对照组以PBS代替OVA,其他处理相同（KO-0d组）。检测内容如下:（1）所有小鼠取肺组织进行H&E和PAS染色,观察小鼠肺组织病理改变;（2）收集肺泡灌洗液（BALF）,ELISA检测IL-4、IL-17、IFN-γ含量,并进行白细胞计数;（3）分离脾脏,并制备单细胞悬液,流式细胞术检测小鼠脾细胞中Th1（CD4+IFN-γ）、Th2（CD4+IL-4）、Th17（CD4+IL-17）、CD4+CD25+Treg细胞比例;（4）流式细胞术分选脾细胞中CD4+T细胞,提取基因组后,用全基因组重亚硫酸盐测序（whole-genome bisulfite sequencing,WGBS）检测PKC-θ敲除的CD4+T细胞全基因组甲基化,采用R软件及其程序包分析差异甲基化区域（differentially methylated region,DMR）?以及DMR相关基因及其启动子的GO分类?KEGG信号通路富集。结果:1.肺组织H&E和PAS染色结果显示,PKC-θ能减少气道炎性细胞的浸润以及气道粘液分泌。2.ELISA结果显示,KO-0d组和KO-21d组小鼠BAFL中的细胞因子IFN-γ水平分别为（117.8±16.8）和（85.3±24.2）pg/ml。与KO-0d组比较,KO-21d组BALF中IFN-γ的含量明显降低（P<0.05）。KO-0d组和KO-21d组BALF中的细胞因子IL-4水平分别为（7.1±2.3）和（14.5±3.6）pg/ml。相比于KO-0d组,KO-21d组IL-4的含量显著增高（P<0.01）。而KO-0d组和KO-21d组的细胞因子IL-17水平分别为（4.3±1.1）和（9.2±4.3）pg/ml。相比于KO-0d组,KO-21d组肺泡灌洗液中IL-17的含量有所增高（P<0.05）。3.流式细胞仪检测结果显示,KO-0d组和KO-21d组小鼠BALF中细胞数分别为（1.41±0.32）和（2.53±0.62）10-4/m L。KO-21d组BALF中细胞的数量显著高于KO-0d组（P<0.01）。KO-0d组和KO-21d组脾细胞中Th1细胞比例分别为（9.45±1.12）%和（6.28±0.94）%。KO-21d组Th1细胞比例显著低于KO-0d组（P<0.01）。KO-0d组和KO-21d组脾细胞中Th2细胞比例分别为（6.62±1.33）%和（7.62±0.89）%。KO-21d组与KO-0d组间Th2细胞比例无显著变化（P>0.05）。KO-0d组和KO-21d组脾细胞中Th17细胞比例分别为（2.12±0.49）%和（4.85±0.66）%。与KO-0d组比较,KO-21d组Th17细胞比例明显增高（P<0.01）。KO-0d组和KO-21d组脾细胞中Treg细胞比例分别为（6.48±1.62）%和（3.00±0.99）%。KO-21d组与KO-0d组比较,Treg细胞比例降低（P<0.01）。4.对WGBS进行数据分析后共获得到14000个显著的DMR,进一步的GO分类结果显示,这些DMRs对生物学进程、细胞组分以及分子功能影响较为广泛。而KEGG分析结果表明,这些DMR关联的基因主要富集到与细胞增殖、缺氧、免疫等与过敏性哮喘紧密相关的生物学相关的信号通路中,如Rap1 signaling pathway、MAPK signaling pathway、Calcium signaling pathway、PI3K-Akt signaling pathway、T cell receptor signaling pathway、HIF-1 signaling pathway、HIF-1signaling pathway等。结论:1.OVA致敏的PKC-θ敲除小鼠表现为增多的气道炎性细胞浸润以及气道粘液分泌;2.过敏性哮喘PKC-θ敲除小鼠BALF中炎性因子IL-4、IL-17分泌增加;3.过敏性哮喘PKC-θ敲除小鼠脾CD4+T细胞中Th2（CD4+IL-4）、Th17（CD4+IL-17）比例上升;4.过敏性哮喘PKC-θ敲除小鼠脾CD4+T细胞中甲基化影响的基因主要与细胞增殖、缺氧、免疫等相关的信号通路。