蠲痹强骨方含药血清对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的影响及其作用机机制研究

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目的:通过体外实验建立成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocyte,FLS)培养体系,观察蠲痹强骨方含药血清对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)-FLS增殖和凋亡,分泌炎症及骨破坏介质以及对中性粒细胞趋化作用的的影响,探讨其作用机制,为临床提供实验依据。  方法:收集人工关节置换的RA患者的关节滑膜,采用胶原酶消化法原代培养,当FLS生长至3-5代进行实验,分别使用不同浓度的蠲痹强骨方含药血清(5%、10%、20%)和对照组血清(生理盐水灌胃组)体外作用于FLS。采用CCK-8法检测FLS增殖,倒置显微镜下观察FLS凋亡和迁移的情况,ELISA检测FLS上清中炎症细胞因子IL-6、IL-8、Cyr61蛋白表达情况,RT-PCR检测FLS凋亡相关基因Bc卜2和Bax mRNA,炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、Cyr61 mRNA及骨破坏细胞因子RANKL/OPG、MMPs mRNA的表达情况;采用共聚焦显微镜观察蠲痹强骨方含药血清对中性粒细胞趋化作用的影响。  结果:1.不同浓度的蠲痹强骨方含药血清对RA-FLS增殖无明显影响,20%蠲痹强骨方含药血清能够抑制FLS凋亡相关基因Bcl-2 mRNA的表达,上调Bax m RNA的表达(P<0.05);2.蠲痹强骨方含药血清能够抑制炎症介质IL-6、IL-8、Cyr61蛋白及IL-1β、IL-6、IL-8、Cyr61 mRNA的表达(P<0.05),20%蠲痹强骨方含药血清能够抑制中性粒细胞趋化;3.蠲痹强骨方含药血清能够抑制RA-FLS的迁移及RANKL、MMP-1、MMP2、MMP-3、MMP-9、MMP-13mRNA的表达,上调OPG mRNA的表达(P<0.05)。  结论:1.蠲痹强骨方含药血清对RA-FLS增殖无明显影响,但能够促进RA-FLS凋亡,其机制可能是通过促进Bax mRNA表达,抑制bcl-2 mRNA表达实现的;2.蠲痹强骨方含药血清能够抑制RA-FLS分泌炎症因子IL-6、IL-8、Cyr61蛋白及IL-1β、IL-6、IL-8、Cyr61 mRNA的表达和中性粒细胞的趋化,从而抑制炎症反应;3.蠲痹强骨方含药血清能够抑制RA-FLS的迁移及RANKL、MMPsmRNA的表达,促进OPG mRNA的表达,从而抑制骨与软骨破坏。
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