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1型糖尿病(Type 1 diabetes mellitus,T1DM)又称胰岛素依赖型糖尿病,是由T淋巴细胞介导的对胰岛β细胞破坏,导致胰岛β细胞死亡的自身免疫病。CD8+细胞毒T细胞(cytotoxic T lymphocytes, CTLs)作为直接破坏者,在T1DM的发生和发展过程中具有重要作用。I型糖尿病模型鼠(NOD小鼠)发病早期体内存在能特异性识别胰岛β细胞上的葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基相关蛋白(IGRP)抗原表位(206-214)的CD8+T细胞,并形成特异性结合的T细胞群。随着病情的发展,IGRP特异性CTL细胞数量在发病15周达到高峰。表面展示技术是以融合蛋白的形式将外源多肽展示在核糖体、病毒或细胞表面,但仍然能够保持其相对独立的空间结构和生物活性,从而研究多肽的性质、相互识别和作用。在蛋白质工程中,表面展示技术是一种在环境生物修复,生物催化等多方面得到应用的基因操作技术,同时还应用于疫苗和治疗药物的开发等方面。酵母是真核生物,具有折叠酶、内质网、分子伴侣等,在蛋白质的折叠和分泌机制等方面与细菌展示技术相比更类似于哺乳动物。基于此建立起来的酵母表面展示技术可用于展示需要糖基化和二硫键异构化等修饰的真核生物蛋白质。本实验室前期将MHC I类分子的重链,β2微球蛋白(β 2m)及抗原肽用接头(linker)连接成单链三聚体(SCT),通过与AGA2连接构建成IGRP206-214H-2Kd-SCT的真核载体。目的：本文章通过研究酵母表面展示的IGRP206-214H-2Kd单链三聚体对NOD小鼠CD8+T细胞的影响,从而阐明胰岛细胞特异性葡萄糖-6-磷酸催化亚基相关蛋白(IGRP)导致TID发病的机理。方法：本实验室前期己成功构建真核表达型IGRP206-214H-2Kd单链三聚体及IGRP206-214H-2Kd单链三聚体的真核酵母表达载体。在此基础上,通过筛选高表达IGRP206-214H-2Kd单链三聚体的酵母菌,进而研究酵母表面展示IGRP206-214H-2Kd单链三聚体对NOD小鼠CD8+T细胞的影响。结果：转染了IGRP206-214H-2Kd单链三聚体的真核表达载体的酵母菌,在含2%D-半乳糖的酵母培养基中,20℃诱导18h,有77.1%的酵母能稳定表达IGRP206-214H-2Kd单链三聚体蛋白。在体外试验中与NOD鼠脾脏细胞共培养24小时CD69+表达量最高,占CD8+T细胞的1.89%；共培养96小时,CD25+表达量最高,占CD8+T细胞的4.25%。表明表达IGRP206-214H-2Kd单链三聚体的酵母菌能激活NOD鼠脾脏CD8+T细胞。结论：本研究为进一步纯化真核表达IGRP206-214H-2Kd单链三聚体蛋白以及研究其在T1D发病过程中的分子机理提供了研究基础。