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肌细胞增强因子2C(Myocyte Enhancer Factor 2C)是肌细胞增强因子2(MEF2)家族的一员,是一种参与多种生物学调控的关键转录因子。MEF2C基因的mRNA前体通过不同的剪切方式产生多个成熟的mRNA可变剪切体,因此,该基因可能编码多种蛋白质。目前在人、小鼠中已分别鉴定出多个MEF2C可变剪切体。而在山羊中,通过转录组测序结果预测出山羊MEF2C基因可能存在10个可变剪切体,但通过实验鉴定和验证的山羊MEF2C的可变剪切体还未见报道。本研究以南江黄羊为试验材料,利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、分子克隆、实时荧光定量(qPCR)、快速转录/翻译偶联系统(TNT系统)、蛋白免疫印迹法(WesternBlotting)和山羊骨骼肌卫星细胞(SMSCs)体外培养等试验技术,克隆山羊MEF2C基因,分离并鉴定山羊MEF2C基因的转录本,从mRNA和蛋白水平研究不同转录本的组织表达模式,主要结果如下。1.在山羊不同组织中发现并鉴定了 MEF2C的4个不同转录本,分别命名为MEF2C1、MEF2C2、MEF2C3和 MEF2C4(GenBank 登录号分别为:KY457285～KY457288)。与山羊全基因组序列比对发现,MEF2C1缺失第Exon8、Exon11 和 Exon12;ME2C2缺失第 Exon7 至 Exon12;ME2C3缺失第Exon8 和 Exon12;ME2C4缺失第 Exon7、Exon8 和 Exon12。2.MEF2C的4个转录本均包含MADS功能域,MEF2C2和MEF2C4缺失了HJURP-C功能域。MEF2C1末端有1个非典型性的低匹配度功能区,MEF2C2、MEF2C3和MEF2C4末端有2个非典型性的低匹配度功能区。3.MEF2 的4个转录本在120 日龄南江黄羊的8个不同组织中的mRNA表达量检测表明:MEF2C1和MEF2C2在背最长肌中有较高水平的表达(P<0.01),MEF2C3在半腱肌和腰大肌中高表达(P<0.01),MEF2C4在背最长肌、半膜肌、半腱肌、腰大肌组织中表达量较高(P<0.01),4个转录本在肝脏和肾脏中表达量均相对较低。不同转录本的表达量存在差异,且差异显著。4.qPCR检测MEF2C 4个转录本在5个不同时期(3d、30d、60d、90d、120d)的肌肉组织中的mRNA表达量发现:4个转录本表现出随日龄的增加先增加后降低的趋势,在30d表达量达到最高(P<0.01),120d的表达量相对最低。5.MEF2C 4个转录本在山羊骨骼肌卫星细胞增殖和分化时期中的mRNA表达量检测表明:MEF2C1、MEF2C3和MEF2C4在分化1d(D1)有较高水平的表达(P<0.01),MEF2C2在分化3d(D3)高表达(P<0.01),4个转录本在增殖期表达量相对较低。6.蛋白免疫印迹方法检测山羊MEF2C蛋白在8个不同组织中的表达,抗体特异性地识别了两个分子量大小有一定差异的蛋白条带。其中,在蛋白分子量为50kDa的位置,MEF2C蛋白在心肌、肝脏和腰大肌中表达水平较高,而在大脑和背最长肌组织中的表达微弱;在蛋白分子量小于25kDa位置的条带中,腰大肌、半膜肌、背最长肌组织中均可以检测到MEF2C蛋白的表达,肾脏中表达量相对较低,心脏中检测不到MEF2C的蛋白表达。7.在山羊骨骼肌卫星细胞中过表达MEF2C2,分化标记基因MyoG的mRNA表达量显著降低(P<0.05),表明过表达MEF2C2对SMSCs分化具有抑制作用。