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【目的】
克隆人肥大细胞类糜蛋白酶(chymase)编码区基因(CMA)，并在大肠杆菌中进行原核表达，制备重组类糜蛋白酶，以之为免疫原免疫家兔制备其多克隆抗体，为进一步研究类糜蛋白酶的生物学功能及建立类糜蛋白酶免疫学检测方法奠定基础。
【方法】
(1)通过RT-PCR克隆人肥大细胞类糜蛋白酶cDNA；
(2)采用Gateway技术构建表达载体pDEST17/CMA；
(3)将表达载体转化大肠杆菌BL21-AI，以L-阿拉伯糖为诱导剂诱导重组蛋白表达；
(4)利用Ni-NTA 层析柱，采用亲和层析法纯化重组蛋白；
(5)利用纯化的重组类糜蛋白酶为免疫原免疫家兔制备多克隆抗体，并以间接ELISA测定抗体效价，Western blot鉴定抗体的特异性。
【结果】
(1)通过RT-PCR成功克隆了人肥大细胞类糜蛋白酶cDNA；
(2)利用Gateway 技术成功地构建了类糜蛋白酶表达载体pDEST17/CMA；
(3)在大肠杆菌 BL21-AI中，以 L-阿拉伯糖为诱导剂成功诱导了重组人肥大细胞类糜蛋白酶的表达，并采用了亲和层析将其纯化；
(4)利用纯化的重组类糜蛋白酶为免疫原免疫家兔，成功制备了兔抗人类糜蛋白酶多克隆抗体，ELISA 结果显示效价大于1:12800，Western blot 分析表明该抗体能特异结合类糜蛋白酶。
【结论】
成功克隆了肥大细胞类糜蛋白酶编码基因；成功地构建了pDEST17-CMA表达载体并表达了重组蛋白；制备了效价及特异性都较高的抗类糜蛋白酶多克隆抗体，为进一步建立类糜蛋白酶免疫学检测方法及深入研究其生物学功能奠定了良好的基础。