【摘 要】
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目的:从人重组的粒细胞集落刺激因子(human recombination granulocyte colony stimulating factor,rhG-CSF)动员的外周血干细胞采集物中分离诱导树突状细胞(dendritic cells
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目的:从人重组的粒细胞集落刺激因子(human recombination granulocyte colony stimulating factor,rhG-CSF)动员的外周血干细胞采集物中分离诱导树突状细胞(dendritic cells,DCs),探讨人肺腺癌细胞株A549总RNA电穿孔法转染DCs来制备疫苗的可行性,并观察DCs疫苗在体外诱导特异性抗肿瘤免疫反应的能力。 方法:用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rh IL-4)从血细胞分离机分离出的外周血采集物中诱导DCs产生,同时从人肺腺癌细胞A549中提取总RNA用以转染DCs,并用转染后的DCs与自体T细胞共同培养,诱导成为细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)。实验分未转染DCs组,转染PBS的DCs组,转染RNA的DCs组,以流式细胞术(FCM)鉴定DCs、T细胞表型、RT-PCR证明总RNA转染效率,MTT检测T细胞增殖能力及乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定杀伤肿瘤活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-12、IFN-γ分泌水平并比较各组差异。 结果:1)RT-PCR证明电穿孔法可成功使A549的总RNA转染入DCs并可使DCs表达肿瘤抗原。2)RNA转染组的DCs表面标志物CD40、CD80、CCR-7、CD83、HLA-DR都呈强阳性表达,表达率明显高于PBS转染组DCs和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);3)流式结果显示RNA转染的DCs刺激后的T细胞表面标志物CD8比例明显上升;4)RNA转染组IL-12、IFN-γ分泌水平明显高于PBS转染组和未转染组(P<0.05);5)RNA转染组DCs可以有效刺激T淋巴细胞增殖,并且诱导肿瘤特异性CTLs产生,对A549细胞产生特异性杀伤作用。而PBS转染组与未转染组则无明显作用(P<0.05)。 结论:利用密度梯度离心法可以从经rhG-CSF动员的外周干血细胞采集物中分离诱导动员的外周血干细胞采集物中分离诱导出具备典型形态和免疫表型的DCs,利用电转染法可成功将A549的总RNA转入DCs内并使其表达肿瘤抗原,在体外能诱导肿瘤特异性免疫反应。
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