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EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)是公认的DNA致瘤病毒,EBV感染诱导抑癌基因启动子区高甲基化被认为是EBV相关肿瘤抑制基因功能失活的关键机制。EBV感染与胃癌的关系已经得到确认,但EBV相关胃癌(EBV-associated gastric carcinoma, EBVaGC)的发病机制有待于深入研究。目的探讨EBV感染对TMEM130基因启动子区甲基化状态及其转录表达的影响,为进一步研究TMEM130基因在EBVaGC发生中的作用机制提供实验基础。方法采用甲基化特异性PCR (Methylation-Specific PCR, MSP)及基于焦亚硫酸氢盐修饰的基因组测序法(Bisulfite genomic sequencing, BGS)检测EBV阴性和阳性胃癌细胞系以及EBVaGC和EBVnGC(EBV-negatived gastric carcinoma, EBVnGC)组织中TMEM130基因启动子区甲基化状态,并比较TMEM130基因甲基化率与胃癌标本临床病理特征的关系。同时采用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR)检测EBVaGC和EBVnGC组织中TMEM130基因的转录表达情况。结果①MSP结果显示4种EBV阳性胃癌细胞系PT, GT38, GT39和SNU719以及5种EBV阴性胃癌细胞系SGC7901, HGC-27, BGC-823, AGS和MKN-45中TMEM130基因启动子区均成M+U型。②EBVaGC病例癌组织和相应癌旁组织中TMEM130基因启动子的甲基化率分别为87.7%(43/49)和22.6%(7/31),统计学分析表明,EBVaGC组织中TMEM130基因启动子的甲基化率明显高于相应癌旁组织(X2=20.56,P<0.0001); EBVnGC癌组织和相应癌旁组织中TMEM130基因启动子的甲基化率分别为68.0%(34/50)和18.0%(9/50),EBVnGC癌组织组织中TMEM130基因启动子的甲基化率也明显明显高于相应癌旁组织(X2=18.58,P<0.0001)。③EBVaGC和EBVnGC组织中TMEM130基因启动子的甲基化率分别为87.7%(43/49)和68.0%(34/50), EBVaGC组织中TMEM130基因启动子的甲基化率明显高于EBVnGC(X2=5.88, P=0.018)。④BGS结果显示同一胃癌组织标本中TMEM130基因启动子的58个CpG位点呈现不同的甲基化状态,不同组织标本间甲基化程度存在一定的差异；其中17例EBVaGC组织中TMEM130基因启动子区有更多的CpG位点呈现甲基化状态,总体甲基化程度高于17例EBVnGC.⑤TMEM130基因启动子区是否发生甲基化与患者性别、年龄、肿瘤直径大小、肿瘤浸润深度、组织学分化程度以及有无淋巴结转移均无明显关系,仅与是否存在EBV感染有关(x2值=14.278,P<0.005)。⑥MEM130基因的转录表达水平在两组胃癌样本间存在一定的统计学差异(t=-2.619,P=0.01)。经计算AACt=ACt阴性组-△ACt阴性组=2.14,提示EBVaGC与EBVnGC组织中TMEM130基因转录表达的差异倍数为2-ΔΔCt=0.227,说明EBVaGC癌组织中TMEM130基因mRNA转录表达水平估值为EBVnGC的0.227倍,即EBVnGC癌组织中的表达水平是EBVaGC的4.41倍。⑦MSP结果显示TMEM130基因为甲基化状态的EBVaGC组织中TMEM130基因的转录表达水平明显低于非甲基化状态的EBVaGC组织标本(t=-3.03,P=0.011),两者的差异表达倍数约为0.122,即EBVaGC样本中未甲基化标本中TMEM130基因的表达是高甲基化标本的8.20倍。而在EBVnGC标本中甲基化样本与非甲基化样本两者之间的差异倍数为0.452,即未甲基化EBVnGC癌组织中TMEM130基因的表达仅是高甲基化标本的2.21倍(t=-2.01,P=0.027)。结论胃癌组织中存在TMEM130基因启动子区的异常甲基化,EBV感染可进一步诱导TMEM130基因启动子区的高甲基化,并通过高甲基化导致EBVaGC组织中下调TMEM130基因的转录表达,进而在EBVaGC的发生发展中发挥一定作用。