胆管癌是预后恶劣的恶性肿瘤，国外统计的5年生存率仅10％，手术切除是目前唯一有效的治疗方法。尽管随着影像诊断和外科技术的进步，胆管癌的预后有所改善，但由于受到特殊解剖位置的影响以及胆管癌本身侵犯血管、神经、淋巴组织和邻近肝组织的特性，期望单纯依靠改进手术方式来大幅度提高胆管癌的治疗效果不太现实。因此必须深入了解胆管癌的发生、发展机理，寻找新的治疗手段。 肿瘤血管形成是肿瘤发生和发展过程中的关键事件之一。国内外很多研究证明，肿瘤血管生成既是实体肿瘤生长的基础，又是转移的重要途径。肿瘤血管形成是一种失控的血管生长，是血管生成因子和抑制因子的失衡。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是一个最具普遍意义的肿瘤血管形成刺激因子，它通过与受体结合，诱导受体磷酸化，进而发挥作用。在乳腺癌、前列腺癌等多种实体肿瘤中表达明显增加，其水平与肿瘤的临床分期和预后有密切关系。核因子kB(nuclear factor-kappa B，NF-kB)是最重要的核转录因子之一，最近发现其影响肿瘤的形成，不仅可以调控肿瘤血管生成的有关基因，还与细胞的转化和凋亡有关。目前国内外有关胆管癌的肿瘤血管形成方面的研究报道甚少。 本研究通过免疫组织化学的方法，对胆管癌患组织的微血管密度、血管内皮生长因子及其受体和核因子kB的表达进行测定，结合临床病理学特征和随访资料进行分析，探讨肿瘤血管形成在胆管癌发病中的作用以及可能的机制。为临床提供一种浙江大学硕士学位论文评价该肿瘤良恶性程度、预测预后的手段，为进一步研究胆管癌的发生、发展机理以及寻找新的治疗手段提供一定的理论基础。 材料和方法 选取浙江大学医学院附属邵逸夫医院和浙江大学医学院附属第二医院1997年10月至2003年n月期间手术治疗的胆管癌病例50例。其中肝门部胆管癌31例，中段胆管癌6例，下段胆管癌13例。患者中男性27例，女性23例，年龄自32一84岁，平均年龄59.3岁。手术方式为:根治性切除术27例，姑息性切除术23例。所有标本均经病理学证实，其中高分化腺癌19例，中分化腺癌21例，低分化腺癌10例;伴有淋巴结转移13例;伴有神经浸润22例;伴有胰腺浸润14例。对照取自9例肝移植供体。 实验分组:取9例肝移植供体的胆管标本作为正常组织;癌旁组织取自27例根治性切除标本的切缘;肿瘤组织取自50例胆管癌的手术切除标本。 随访:通过电话调查、信访调查，结合门诊随访的方式了解27例接受根治性手术治疗的胆管癌患者自手术之日起至2004年3月20日是否存活、存活时间及其死亡原因。 采用免疫组化En Vi 510。二步法检测微血管密度(MVD)、vEGFI。:、vEGFR一2 又Flk一l/KDR)、NF一kBp65的表达。结果判断:1、CD34阳性判断及MVD测定，血管内皮细胞被染成棕黄色，以与背景明显有别的任何一个染色的内皮细胞或细胞群作为一个血管。先在低倍镜下(10 x 10)寻找血管最高密度区(hotspot)，然后在高倍镜下(10X40)计数5个血管最高密度区的微血管数，取均值代表MVD。2、VEGF165、Flk一1/KDR和 NF一kBp65阳性结果判断，阳性表达为细胞胞浆染成棕黄色，高倍镜下 (10 X40)取5个不同视野，每个视野计数100个细胞，将阳性细胞的百分率和染色强度分别计分。具体计分标准如下:(1)阳性细胞的百分率<sryoo分，5%一25ryol分，26%~50%2分，slok一75%3分，>75%4分。(2)阳性细胞的染色强度为无染色O分，染成淡棕黄色1分，染成棕黄色2分，染成深棕色或胞浆中出现深棕色斑块3分。(1)+(2)为组织总积分，总分分为O一7分。O分为阴性，1~3分为弱阳性(+)，浙江大学硕士学位论文4一7分为强阳性(++)。其中阳性细胞百分率用通用医学图像处理系统计算。 所有数据处理皆采用SPSS n.0 for windows软件包进行统计分析。其中定量数据采用方差分析，定性数据卡方检验，生存资料采用Ka口an一Meier生存分析。 结果与讨论 MVD在胆管癌组织和癌旁组织中的水平高于正常组织(P<0.01)。MVD水平与患者的年龄、性别和肿块部位和组织学类型均无相关性(P>0.05)。伴有淋巴转移的组织娜D水平高于无淋巴转移组，伴有神经浸润的组织娜D水平高于无神经浸润组，其差异均有统计学意义(以0.05)。对根治性手术治疗患者的随访，MVD<30的患者平均生存时间为26.83个月，MVD为30一39的患者平均生存时间为13.83个月，刚D)40的患者平均生存时间为5.75个月，三组间生存率的差异有统计学意义 (p<0.05)。以上结果表明微血管形成在胆管癌的发病中有着重要的意义。以往的研究证实淋巴转移和神经浸润是提示胆管癌预后的两个独立因素，结合术后随访，我们认为肿瘤血管形成与胆管癌预后相关，高水平的MVD提示预后不良。 VEGF:65在肿瘤组织和癌旁组织中的表达高于正常组织，VEGFR一2(Flk一1/KDR)在肿瘤组织和癌旁组织中的表达水平也高于正常组织，差异均有统计学意义(P<0 .05)。同时VEGF，6，和Flk一1/KDR均与刚D水平呈正相?