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目的建立SD大鼠和Wi star大鼠同种异体卵巢皮下游离移植模型,并以Wi star大鼠自体卵巢皮下游离移植模型作为对照组,以补肾安胎中药复方“寿胎丸”进行干预,观察卵巢移植模型组织形态学与超微结构的变化、凋亡指数及凋亡相关基因Bcl-2、Bax. Fas. FasL的表达、卵巢激素E2的水平,探讨“寿胎丸”抗卵巢移植急性排斥反应的机理。方法210只Wistar雌性大鼠随机分为7组,每组30只。①自体移植模型组；②自体移植+寿胎丸组；③异体移植模型组；④异体移植+寿胎丸组；⑤异体移植+CsA组；⑥异体移植+CsA及寿胎丸组；⑦正常对照组。①、②建立自体卵巢皮下游离移植模型,③、④、⑤、⑥建立同种异体卵巢移植模型,受体Wistar大鼠,供体SD大鼠,⑦行开腹缝合假手术处理,为正常对照组。术后给药,②自体移植+寿胎丸组和④异体移植+寿胎丸组予寿胎丸水煎剂,按26.8g/kg/d剂量灌胃,连用28天；⑤异体移植+CsA组予CsA,按10mg/kg/d剂量灌胃,连用14天,然后减量,按6mg/kg/d剂量连用14天；⑥异体移植+CsA及寿胎丸组同时予CsA和寿胎丸水煎剂,剂量同前；①自体移植模型组、③异体移植模型组、⑦正常对照组予生理盐水,按5ml/kg/d剂量灌胃,连用28天。各组于移植术后d7、d14、d21、d28、d35分批处死Wi star大鼠各6只,取双侧移植卵巢：在电镜下观察移植卵巢超微结构变化,新生血管的形态学特征；光镜下计算各个发育阶段卵泡、黄体的数量,观察间质的变化；TUNEL试剂盒检测移植卵巢凋亡指数；免疫组化检测凋亡相关基因Bcl一2／Bax.凋亡因子Fas及其天然配体FasL的表达；移植术前1天眼眶后静脉丛取血测血清E2,移植术后取三次血,第6-15天、第16-25天以及第26-35天,根据阴道涂片,选雌激素分泌最高峰当日,取血测血清E2。观察记录各组动物的体重及进食等一般情况。结果1、血清内分泌激素E2的变化各组卵巢移植大鼠移植术前的血清E2水平稍低于正常对照组静止期的E2水平,差异无统计学意义(P＞0.05)。移植术后6-15天,①自体移植模型组、②自体移植+寿胎丸组、⑤异体移植+CsA组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组大鼠的E2水平有大幅度升高,①自体移植模型组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组大鼠的血清E2与正常对照组血清E2比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；③异体移植模型组、④异体移植+寿胎丸组大鼠的E2水平不升反降,分别与⑤异体移植+CsA组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组大鼠的血清E2比较,均有统计学意义(P＜0.05)；血清E2水平,⑥异体移植+CsA及寿胎丸组>⑤异体移植+CsA组>④异体移植+寿胎丸组、③异体移植模型组；③异体移植模型组与①自体移植模型组E2水平相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。移植术后16-25天,①自体移植模型组、②自体移植+寿胎丸组、⑤异体移植+CsA组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组E2水平分别与③异体移植模型组、④异体移植+寿胎丸组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)；①自体移植模型组和②自体移植+寿胎丸组E2水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。移植术后26-35天,①自体移植模型组、②自体移植+寿胎丸组、⑤异体移植+CsA组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组E2水平仍高于③异体移植模型组和④异体移植+寿胎丸组,有统计学意义(P<0.05)；④异体移植+寿胎丸组E2水平稍高于③异体移植模型组,但差异无统计学意义(P>0.05)；①自体移植模型组和②自体移植+寿胎丸组E2水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。2、移植卵巢组织形态学的变化石蜡切片HE染色观察移植卵巢内各级卵泡和黄体数目,①自体移植模型组、②自体移植+寿胎丸组、④异体移植+寿胎丸组、⑤异体移植+CsA组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组卵巢内各级卵泡和黄体的数目,均多于③异体移植模型组,少于⑦正常对照组；②自体移植+寿胎丸组的原始卵泡明显多于①自体移植模型组；⑥异体移植+CsA及寿胎丸组的卵泡和黄体多于⑤异体移植+CsA组、④异体移植+寿胎丸组；③异体移植模型组大鼠卵巢仅在移植后7天出现黄体,其余各时间点,均未发现各级卵泡和黄体。电镜观察发现,存活的自体移植卵巢细胞,超微结构基本正常,仅见线粒体和内质网轻度扩张,新生血管有扩张瘀血现象。异体移植卵巢的细胞坏死和凋亡严重,坏死细胞细胞核变形,染色质边集,细胞膜不完整,细胞器极少,线粒体空泡化,脂滴丰富。凋亡细胞的细胞核固缩,核周间隙增宽,染色质凝集,形成不同性状和大小的块状,并逐步分裂为碎片；胞质致密,细胞器浓缩,失去水分；细胞膜下陷,包裹核碎片和细胞器,形成凋亡小体。移植卵巢内聚集大量巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞,新生血管有扩张瘀血现象,移植后期卵巢组织纤维化。经积极抗排斥治疗的大鼠,卵巢细胞超微结构基本正常,胞浆内细胞器较多,线粒体与内质网有不同程度肿胀。3、凋亡细胞数、Bcl-2、Bax、Fas、FasL的变化TUNEL法检测移植卵巢内的细胞凋亡数,③异体移植模型组凋亡细胞最多,⑦正常对照组凋亡细胞最少；③异体移植模型组多于①自体移植模型组(P<0.05)；④异体移植+寿胎丸组、⑤异体移植+CsA组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组的凋亡细胞均少于③异体移植模型组(P<0.05)；②自体移植+寿胎丸组的凋亡细胞少于①自体移植模型组(P<0.05)。检测移植卵巢内的Bcl-2表达,发现移植术后①自体移植模型组与③异体移植模型组大鼠卵巢内的Bcl-2水平与正常组比较明显降低(P<0.05)；②自体移植+寿胎丸组的Bcl-2水平高于①自体移植模型组(P<0.05)；移植后7天,⑤异体移植+CsA组的Bcl-2高于③异体移植模型组和④异体移植+寿胎丸组(P<0.05)；移植后35天,④异体移植+寿胎丸组、⑤异体移植+CsA组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组的Bcl-2水平均高于③异体移植模型组(P<0.05),寿胎丸与CsA的的交互作用是负向的。检测移植卵巢内的Bax表达,移植14天,①自体移植模型组的Bax水平低于③异体移植模型组和⑦正常对照组(P＜0.05),其余各时点,三组比较,均无明显差异(P>0.05)；②自体移植+寿胎丸组的Bax水平低于①自体移植模型组(P<0.05)；移植后14天,④异体移植+寿胎丸组、⑤异体移植+CsA组、⑥异体移植+CsA及寿胎丸组的Bax水平低于异体移植模型组(P＜0.05),CsA和寿胎丸的交互作用是负向的。检测移植卵巢内的Fas表达,经统计分析,移植后14天,①自体移植模型组的Fas水平低于⑦正常对照组(P<0.05),其余各时间点,①自体移植模型组、③异体移植模型组与⑦正常对照组比较,均无明显差异(P>0.05);①自体移植模型组和②自体移植+寿胎丸组的Fas水平,在移植后各个时间点比较,差异均无统计学意义(P>O.05)：移植术后28天,⑤异体移植+CsA组的Fas水平低于③异体移植模型组和④异体移植+寿胎丸组,⑥异体移植+CsA及寿胎丸组Fas水平低于④异体移植+寿胎丸组(P<0.05)。寿胎丸、CsA的交互作用为正向效应。检测移植卵巢内的FasL表达,①自体移植模型组、③异体移植模型组大鼠卵巢内的FasL水平,与正常对照组在各时间点比较,均无明显差异(P＞0.05)；①自体移植模型组和②自体移植+寿胎丸组大鼠的FasL水平,在移植后各个时间点比较,差异均无统计学意义(P>0.05)；异体卵巢移植各组大鼠卵巢内的FasL水平比较,在移植术后各时间点,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论1白体卵巢冻融后移植是可行的,移植后的卵巢具有内分泌功能,并能保存较多的卵泡；异体卵巢移植经积极抗排斥治疗后也有内分泌功能,但卵泡丢失较多。2寿胎丸有抗异体卵巢移植排斥反应的作用。在提高内分泌激素E2水平和保存卵泡方面,寿胎丸与CsA有协同作用。3细胞凋亡与排斥反应相关,寿胎丸与CsA均能抑制急性排斥反应中卵巢细胞的凋亡,但CsA作用更明显,在抑制卵巢细胞凋亡方面,未发现寿胎丸和CsA有协同作用。4寿胎丸抗大鼠同种异体卵巢移植急性排斥反应的机理,可能与其调控细胞凋亡有关,CsA和寿胎丸均能升调Bcl-2表达,降调Bax表达,升调Bcl一2／Bax的比值,从而发挥抑制卵巢细胞凋亡的作用；寿胎丸调控卵巢细胞内Fas.FasL因子的作用不明显。5寿胎丸可减少自体移植卵巢内原始卵泡的丢失,可能与其抑制卵巢细胞凋亡的作用相关,而但其在短期内提高自体移植卵巢成活率、提高内分泌激素E2水平的作用尚不明显。