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金钱草系报春花科珍珠菜属植物过路黄(Lvsimachia christinae Hance)的新鲜或干燥全草,主产于四川、浙江等地。具有清热利湿、通淋消肿等功能;用于黄疸、尿赤、肝胆结石等症。现代研究表明金钱草总黄酮具有预防草酸钙结石形成和复发的作用,另外还有显著的抗炎作用,增加冠脉血流量等。但在《中国药典》2005版中,缺少对金钱草质量优劣的评价,本文以金钱草的主要有效成分为依据,利用高效液相色谱法对主要有效成分进行了含量测定,从而判定金钱草的质量。金钱草中主要含有黄酮类成分,据有关文献报导,异鼠李素、山奈酚、槲皮素是金钱草总黄酮中的常见成分。本次试验设计是首先从利用微波萃取和大孔树脂色谱提取并纯化金钱草总黄酮,然后利用高效液相色谱对其中槲皮素和山奈酚进行定量分析,从而判断金钱草的质量。本次实验首先采用正交试验设计优选出微波萃取金钱草总黄酮的最佳工艺条件:即50%乙醇8倍量,于60℃条件下萃取30 min。同时考虑了溶剂浓度,固液比,温度和提取时间对提取效果的影响。考察的几个影响中,溶剂的浓度对结果的影响最大,其次是提取的温度,而提取时间和固液比对结果的影响较小,可以根据实际条件和需要选择。采用微波萃取金钱草总黄酮,平均黄酮含量为5.58%,而采用传统的乙醇回流法提取的提取率只有3.09%,微波萃取法的效率要高80%以上。而且时间短,溶剂省,效果好。为进一步纯化金钱草总黄酮,我们以饱和吸附量、回收率和纯度作为考察指标,综合比较了D101、AB-8、NKA-9三种大孔树脂对金钱草总黄酮的吸附分离性能。研究表明,NKA-9(极性)树脂的综合表现要优于D101(非极性)和AB-8(弱极性)树脂。NKA-9树脂对金钱草总黄酮的饱和吸附量为51.2 mg·g-1,洗脱率为96.5%。经实验研究,NKA-9纯化金钱革总黄酮的最佳工艺条件为:上样浓度20 mg·mL-1,6倍量纯水洗涤,50%乙醇洗脱。经NKA-9型树脂吸附分离后,总黄酮纯度可达60.8%,树脂可反复使用4次。本文还探讨了NKA-9型大孔树脂分离纯化金钱草总黄酮的动力学过程,绘制了渗漏曲线和洗脱曲线来描述动态吸附-洗脱过程,并建立了此方程的数学方程:y=u(1-e-kx)。吸附与洗脱的过程十分复杂,此曲线和方程能大致描绘了3个步骤:流动相向树脂颗粒的渗透过程;有效成分与树脂颗粒间的吸附与解吸附过程;吸附-解吸附过程趋于平衡。经过纯化后的金钱草总黄酮通过HPLC对其中的槲皮素和山奈酚进行了含量测定。经实验研究,最佳的含量测定工艺如下:Nova—Pak C18柱上对目标化合物的甲醇溶液进行洗脱,流动相选用甲醇—水—磷酸(500:500:1),25℃下流速为1ml/min进行洗脱,槲皮素的保留时间大约在5.1min左右,山奈酚的保留时间约在8.8min左右,检测波长为360nm。实验结果表明,槲皮素和山奈酚的标准曲线都具有良好的线性关系(r2>0.999),而且线性范围均比较宽。两种成分的精密度的RSD分别为0.31%和0.27%,平均回收率在101~105%范围内。在重复性实验中,两者的RSD分别为2.95%和1.67%,并在稳定性实验中发现其能在24h内保持稳定。在实验过程中,色谱的峰型和分离度均令人满意,可用于其他黄酮醇类化合物的测定,本次研究,为金钱草的质量标准提供了依据,奠定了基础。