【摘 要】
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目的：肌球蛋白轻链激酶（myosin light chain kinase MLCK)能够磷酸化肌球蛋白（myosin)的20kDa轻链,磷酸化的mosin与肌动蛋白（actin）相结合,引起肌肉收缩,MLCK对于肌肉的收缩和松弛
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目的：肌球蛋白轻链激酶（myosin light chain kinase MLCK)能够磷酸化肌球蛋白（myosin)的20kDa轻链,磷酸化的mosin与肌动蛋白（actin）相结合,引起肌肉收缩,MLCK对于肌肉的收缩和松弛有重要的调节作用.多种哺乳动物及少数无脊椎动物的MLCK基因已经被克隆,但豚鼠（guinea pig）的MLCK基因至今为止尚未被克隆.该实验旨在从GBaSM-4细胞株（guinea pig basal artery smooth muscle cell line）构建cDNA文库并筛选豚鼠smMLCK cDNA,为其进一步应用打下基础.方法：培养GBaSM-4细胞至所需数量,提取RNA后反转录合成cDNA,再与ZAP Express Vector相连,扩增文库后测定效价,并鉴定重组子插入片段大小.再以MLCK序列保守性为依据合成的M5F,M6R为引物,单链cDNA为模板,PCR扩增探针,测序后标记.重复筛选cDNA文库直至可以挑取单个阳性克隆并提取质粒,测序后与GenBank数据库做序列同源性比较.结论:第一次克隆得到长1833bp的豚鼠smMLCK cDNA片段,序列被GenBank收录.又用豚鼠脑基底动脉平滑肌细胞,成功构建了高质量的cDNA文库,并从此文库中,成功地筛选得到长度为2349bp的豚鼠smMLCK cDNA片段的克隆,测序结果与兔,人,牛,鸡的smMLCK的催化域，调节域及肌球蛋白结合域的核苷酸序列有高度的同源性，说明了这些哺乳动物和鸡的smMLCK的这些区域核苷酸序列的高度保守性.对豚鼠smMLCK全长cDNA序列的最后确定则有待于进行下一步的研究工作.
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