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目的：利用已有的TEB4截短体基因重组质粒和TEB4的RNA干扰重组质粒转染人胚肾293细胞，建立TEB4过表达及其RNA干扰细胞模型。毒素诱导细胞模型发生内质网应激，检测细胞内质网应激相关基因(CHOP、GRP78、GRP94)表达的变化。探讨某些毒素诱导内质网应激时，TEB4截短体基因对内质网应激相关因子mRNA和蛋白水平表达的影响，及其在细胞应激中的作用。
方法：1、用脂质体转染法将TEB4截短体重组质粒(pEGFP-TEB4)和TEB4的RNA干扰片段重组质粒(pSuper-EGFP-RNAi)分别瞬时转染人胚肾293细胞，建立相应的TEB4截短体过表达细胞模型和TEB4干扰细胞模型。以分别转染pEGFP-N2和pSuper-EGFP质粒的293细胞为对照组。2、实时荧光定量PCR(RT-PCR)、Western blot法检测各组细胞模型中TEB4的表达，以确定细胞模型是否制备成功。3、转染48小时后，分别以鱼藤酮、衣霉素和Aβ25-35蛋白诱导各组细胞模型发生内质网应激，在毒素作用不同时间收获细胞，RT-PCR、Western blot法测定内质网应激相关因子CHOP、GRP78和GRP94在不同细胞模型组中的表达，探讨TEB4在内质网应激中的作用。
结果：1、RT-PCR、Western blot法分别检测到EGFP-TEB4过表达细胞模型组中TEB4的mRNA水平的表达量是其对照组pEGFP-N2的2.02倍，蛋白水平的表达量是其对照组pEGFP-N2的1.13倍；相对于对照组pSuper-EGFP，EGFP-RNAi干扰细胞模型组中TEB4的mRNA水平及蛋白水平的抑制率分别是62.96％和60.82％。表明细胞模型建立成功。2、衣霉素诱导的内质网应激中，24小时和48小时，TEB4干扰组中GRP78、GRP94的mRNA和蛋白水平都明显高于TEB4过表达组(p<0.01,p<0.01)；各组间CHOP的表达无论是mRNA水平还是蛋白水平都没有显著差异。Aβ25-35蛋白诱导内质网应激作用4小时，TEB4干扰组中CHOP的mRNA和蛋白水平都明显高于TEB4过表达组(p<0.05，p><0.05)；而24小时后，CHOP的mRNA和蛋白水平表达量很低，各组之间没有显著差异。作用24小时后，TEB4干扰组中GRP78的mRNA和蛋白水平都明显高于TEB4过表达组(p<0.01.p<0.05)。在鱼藤酮诱导细胞后未检测出基因明显表达变化。
结论：在衣霉素和Aβ25-35蛋白诱导293细胞发生内质网应激中，TEB4截短体缓解了应激引起的CHOP、GRP94和GRP78基因的表达上调。
目的：分别构建ATP合酶F0亚基C6亚单位(ATP synthase F0 subunit6，ATP-C6)及人膜相关蛋白TEB4截短体基因C末端大片段(TEB4-C)的重组载体。
方法：PCR法扩增TEB4-C，经纯化、双酶切后克隆入pEGFP-N2载体，构建重组质粒pEGFP-TEB4-C，酶切和测序进行鉴定；同样，ATP-C6克隆入pCMV-HA载体，构建pCMV-HA-ATP-C6的重组质粒，酶切和测序进行鉴定。
结果：双酶切重组质粒获得特定的酶切图谱，证实所合成核酸片段的正确重组：测序结果显示重组核酸片段序列与设计的序列完全相同。
结论：成功构建了人膜相关蛋白TEB4截短体基因大片段重组质粒pEGFP-TEB4-C和ATP合酶F0亚基C6亚单位的重组质粒pCMV-HA-ATP-C6，为下一步TEB4功能域的研究打下基础。